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aofeng860308木蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化與表達(dá)
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| 最近做一批重組質(zhì)粒，測(cè)序正確。打算轉(zhuǎn)rosetta和bl21做表達(dá)，然而經(jīng)過(guò)好幾次的折騰，就是一個(gè)菌不長(zhǎng)。排除了感受態(tài)，抗性，質(zhì)粒質(zhì)量及操作過(guò)程中的問(wèn)題，可是依然沒(méi)能解決問(wèn)題。我想問(wèn)一下還有哪些可能的因素影響質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。還有一個(gè)問(wèn)題，我做了一個(gè)NusA做融合伴侶的重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化表達(dá)質(zhì)粒成功后不表達(dá)，沒(méi)有移碼，用IPTG 0.5mM誘導(dǎo)3h，無(wú)任何表達(dá)。請(qǐng)大俠們幫忙看看到底是哪里出現(xiàn)了問(wèn)題。 |
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aofeng860308: 回帖置頂 2012-08-09 21:50:47
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| 1.你確定你說(shuō)的那些都沒(méi)問(wèn)題嗎，比如抗性，會(huì)不會(huì)加多了，幾乎都?xì)⑺懒恕?br /> 2.“重組質(zhì)粒，測(cè)序正確”是什么意思？你的質(zhì)粒本身就是已經(jīng)重組完的嗎？還是說(shuō)pcr產(chǎn)物序列正確？如果你經(jīng)過(guò)連接的話，是不是你連接的比例有誤？ |
3樓2012-08-09 15:46:10
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9樓2012-08-10 22:30:55
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