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番茄培養(yǎng)基鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
兩個質(zhì)粒同時轉(zhuǎn)大腸DH5α 已有3人參與
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| 各位大神:小弟想知道DH5α的一些詳細信息,可是查不到。例如菌種是否含有游離質(zhì)粒等等。還有一個問題想請教,我的質(zhì)粒酶切后用T4連接酶鏈接,轉(zhuǎn)入大腸中。但是T4鏈接后,估計有沒連上的,這樣混合導入大腸中,是否可行? 該大腸萬一一起導入了兩種質(zhì)粒,可以復制嗎? 拜托了 |

木蟲 (正式寫手)
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DH5a 無游離質(zhì)量,詳細情況參加連接:http://ecoliwiki.net/colipedia/index.php/DH5_alpha 至于你說的共轉(zhuǎn)化問題,如果你目的片段沒有連接上去,但你載體自連的話就有可能存在你說的問題。如果自連,當然能復制。不過不用擔心一般我們酶切后的粘性末端不是同種妹切位點,所以一般不會自連。如果發(fā)生,你測序結果就能看出來哈! |

專家顧問 (正式寫手)
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專家經(jīng)驗: +220 |
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概念問題, 1 質(zhì)粒相容性 某種原核生物能否容納一種以上的質(zhì)粒,或者哪幾種質(zhì)?梢怨泊,這個主要取決于這些質(zhì)粒的“復制子”是否相容。這個方面的詳細信息去看《分子克隆》3rd好了。 另外,同一個菌中同時又兩種甚至以上質(zhì)粒共存的簡單例子很多,比如腺病毒用來重組腺病毒基因組的宿主菌,已經(jīng)含有了一個很大的質(zhì)粒。又比如原核表達常用的什么pLsisS,Rosetta之類。 2 感受態(tài)的效率 感受態(tài)的效率用兩個指標評價,常用的比如說某個感受態(tài)達到了10的多少次方,說的是0.1 ng pUC19這個質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化一定體積的感受態(tài),能形成這么多克隆。 這是務實的一種評價,也就是說我只關心我轉(zhuǎn)化之后能把我的DNA多少轉(zhuǎn)進去。 另一種評估效率是一定感受態(tài)細胞,有多少能夠被轉(zhuǎn)化,這反映的是感受態(tài)的絕對質(zhì)量。 可以想象,人類制備的感受態(tài),其效率不可能高到一個細胞可以分配1個以上的質(zhì)粒。 所以平時不可能出現(xiàn)做個轉(zhuǎn)化,嘿,某一個轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)進去了2個質(zhì)粒甚至更多。 |
木蟲 (著名寫手)

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