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番茄培養(yǎng)基鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
兩個(gè)質(zhì)粒同時(shí)轉(zhuǎn)大腸DH5α 已有3人參與
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| 各位大神：小弟想知道DH5α的一些詳細(xì)信息，可是查不到。例如菌種是否含有游離質(zhì)粒等等。還有一個(gè)問題想請(qǐng)教，我的質(zhì)粒酶切后用T4連接酶鏈接，轉(zhuǎn)入大腸中。但是T4鏈接后，估計(jì)有沒連上的，這樣混合導(dǎo)入大腸中，是否可行？ 該大腸萬(wàn)一一起導(dǎo)入了兩種質(zhì)粒，可以復(fù)制嗎？ 拜托了 |
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Sthunder
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
番茄培養(yǎng)基(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-07 10:08:00
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番茄培養(yǎng)基(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-07 10:08:00
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DH5a 無(wú)游離質(zhì)量，詳細(xì)情況參加連接：http://ecoliwiki.net/colipedia/index.php/DH5_alpha 至于你說(shuō)的共轉(zhuǎn)化問題，如果你目的片段沒有連接上去，但你載體自連的話就有可能存在你說(shuō)的問題。如果自連，當(dāng)然能復(fù)制。不過(guò)不用擔(dān)心一般我們酶切后的粘性末端不是同種妹切位點(diǎn)，所以一般不會(huì)自連。如果發(fā)生，你測(cè)序結(jié)果就能看出來(lái)哈！ |
2樓2014-04-07 09:48:56
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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概念問題， 1 質(zhì)粒相容性 某種原核生物能否容納一種以上的質(zhì)粒，或者哪幾種質(zhì)粒可以共存，這個(gè)主要取決于這些質(zhì)粒的“復(fù)制子”是否相容。這個(gè)方面的詳細(xì)信息去看《分子克隆》3rd好了。 另外，同一個(gè)菌中同時(shí)又兩種甚至以上質(zhì)粒共存的簡(jiǎn)單例子很多，比如腺病毒用來(lái)重組腺病毒基因組的宿主菌，已經(jīng)含有了一個(gè)很大的質(zhì)粒。又比如原核表達(dá)常用的什么pLsisS，Rosetta之類。 2 感受態(tài)的效率 感受態(tài)的效率用兩個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)，常用的比如說(shuō)某個(gè)感受態(tài)達(dá)到了10的多少次方，說(shuō)的是0.1 ng pUC19這個(gè)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化一定體積的感受態(tài)，能形成這么多克隆。 這是務(wù)實(shí)的一種評(píng)價(jià)，也就是說(shuō)我只關(guān)心我轉(zhuǎn)化之后能把我的DNA多少轉(zhuǎn)進(jìn)去。 另一種評(píng)估效率是一定感受態(tài)細(xì)胞，有多少能夠被轉(zhuǎn)化，這反映的是感受態(tài)的絕對(duì)質(zhì)量。 可以想象，人類制備的感受態(tài)，其效率不可能高到一個(gè)細(xì)胞可以分配1個(gè)以上的質(zhì)粒。 所以平時(shí)不可能出現(xiàn)做個(gè)轉(zhuǎn)化，嘿，某一個(gè)轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)進(jìn)去了2個(gè)質(zhì)粒甚至更多。 |
3樓2014-04-07 14:57:14
Hliotrope
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4樓2014-04-08 08:43:12
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