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[求助]
關(guān)于RNA電泳的一些疑惑
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作為分子生物學(xué)的初學(xué)者，我最近準(zhǔn)備做RNA電泳，有一些疑惑，在這里向各位大人們請教，希望得到解答。： 1、RNA電泳是否可以直接使用瓊脂糖膠？我看到很多人說應(yīng)該使用變性膠。 2、RNA電泳的loading buffer與Marker是否是專有的？可不可以直接使用DNA電泳的呢？ 3、電泳之后很多人說會出現(xiàn)三條帶。是三條帶一起出現(xiàn)嗎？有沒有亮度的區(qū)別呢？ |
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2樓2012-08-10 09:16:32
tiani_tan
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【答案】應(yīng)助回帖
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vivian26: 金幣+1, ★★★很有幫助 2012-08-12 00:00:18
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主要看你的目的是什么。（以下內(nèi)容僅限于普通的rt-pcr及qPCR） 1：電泳，用瓊脂糖就行，1%即可，至于變性，如果質(zhì)量要求高的話可以試試，但比較麻煩。 2：loadingbuffer可以用DNA電泳的，但若使用marker的話，有RNA電泳專用的，DNA marker畢竟和RNA結(jié)構(gòu)不一樣。也有說28S rRNA在2000bp的上方，不知道準(zhǔn)不準(zhǔn)。不用marker也行，畢竟你不需要知道大小，只要提出出總RNA，質(zhì)量沒問題就行。 3：理論上時三條帶，28S是18S的2倍，質(zhì)量好的話5S看不到，一般都會有點降解，所以都會看見5S。 PS：質(zhì)量和濃度還可以通過紫外分光光度計測量A230，A260，A280看比值 |
3樓2012-08-10 20:47:36
zhangby2002
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6樓2012-08-11 23:13:21
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