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[求助]
關(guān)于RNA電泳的一些疑惑
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作為分子生物學(xué)的初學(xué)者,我最近準備做RNA電泳,有一些疑惑,在這里向各位大人們請教,希望得到解答。: 1、RNA電泳是否可以直接使用瓊脂糖膠?我看到很多人說應(yīng)該使用變性膠。 2、RNA電泳的loading buffer與Marker是否是專有的?可不可以直接使用DNA電泳的呢? 3、電泳之后很多人說會出現(xiàn)三條帶。是三條帶一起出現(xiàn)嗎?有沒有亮度的區(qū)別呢? |

銀蟲 (小有名氣)


金蟲 (小有名氣)
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主要看你的目的是什么。(以下內(nèi)容僅限于普通的rt-pcr及qPCR) 1:電泳,用瓊脂糖就行,1%即可,至于變性,如果質(zhì)量要求高的話可以試試,但比較麻煩。 2:loadingbuffer可以用DNA電泳的,但若使用marker的話,有RNA電泳專用的,DNA marker畢竟和RNA結(jié)構(gòu)不一樣。也有說28S rRNA在2000bp的上方,不知道準不準。不用marker也行,畢竟你不需要知道大小,只要提出出總RNA,質(zhì)量沒問題就行。 3:理論上時三條帶,28S是18S的2倍,質(zhì)量好的話5S看不到,一般都會有點降解,所以都會看見5S。 PS:質(zhì)量和濃度還可以通過紫外分光光度計測量A230,A260,A280看比值 |

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