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lixilei1314金蟲 (小有名氣)
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[求助]
雙酶切后目的條帶的疑問(wèn)？
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如何： 小弟最近在做重組質(zhì)粒的雙酶切，然后連接。 1，連接以后轉(zhuǎn)化BL21培養(yǎng)基篩選，老是不長(zhǎng)細(xì)菌，基本上平板上一個(gè)細(xì)菌都不長(zhǎng)，不知道是什么原因？沒(méi)連接好？ 2，看我雙酶切的條帶，PET-28雙酶切之后條帶很暗很暗（3ul的上樣量），同樣，第一個(gè)和第二個(gè)的目的條帶也很暗，第三個(gè)目的條帶比較亮。請(qǐng)問(wèn)各位大俠這樣的條帶可以割膠回收做連接嗎？ 3， 為什么雙酶切之后，克隆載體亮度會(huì)比目的條帶的亮度亮很多呢？按說(shuō)他們的濃度應(yīng)該是一樣的��？ |
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hao327791557
銀蟲 (小有名氣)
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9樓2013-07-21 11:48:06
xiaoweiwei121
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lixilei1314: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，晚上就做個(gè)空載體對(duì)照看看。 2012-08-22 13:27:15
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1：做個(gè)對(duì)照試驗(yàn)沒(méi)，轉(zhuǎn)一下空載體，看看長(zhǎng)不長(zhǎng)，然后確定是不是連接的問(wèn)題 2：載體和第一、第二個(gè)目的條帶，量太少了，再加上回收過(guò)程中的損失，估計(jì)會(huì)看不到了，如果你想用于做連接，那就多切點(diǎn)吧。第三個(gè)目的條帶，看在濃度還可以 3：濃度相同，但是片段大小卻不相同 |
2樓2012-08-22 06:05:43
yyk81
木蟲 (正式寫手)
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3樓2012-08-22 07:43:00
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4樓2012-08-22 08:09:45
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