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[求助]
欲檢測重組蛋白能否被磷酸化
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如題，我想重組個含有磷酸化位點的蛋白，然后檢測下這個蛋白能否被磷酸化； 如果可以的話有沒有什么方法能夠確定一下蛋白的磷酸化位點. 請大家多多指教、探討！ |
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mitocam
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-08-24 13:44:42
tianmaxk: 金幣+2, ★★★很有幫助, 非常感謝！追問一下，一般用什么酶對磷酸化位點進行磷酸化？磷酸化位點只有一個能否檢測出來？ 2012-08-24 14:36:10
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試用一下PhosTag SDSPAGE，如果運氣好，磷酸化的蛋白質(zhì)和未磷酸化的（用堿性磷酸化酶處理一下）同時跑膠，看看是否有明顯差異。我檢測過單個磷酸化位點的蛋白質(zhì)，分離的很好，很容易就區(qū)別出來了。也有蛋白質(zhì)無法分離的。 測定磷酸化位點，如果有條件可以用質(zhì)譜分析，分離到磷酸化肽測序。如果上述PhosTag方法可行，突變最可能的磷酸化位點，檢驗是否點突變消除了磷酸化，這是一個苯方法。 |
2樓2012-08-24 04:43:19
mitocam
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4樓2012-08-24 14:38:15
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5樓2012-08-24 16:23:26
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6樓2012-09-17 11:09:09
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