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[求助]
欲檢測(cè)重組蛋白能否被磷酸化
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如題，我想重組個(gè)含有磷酸化位點(diǎn)的蛋白，然后檢測(cè)下這個(gè)蛋白能否被磷酸化； 如果可以的話有沒(méi)有什么方法能夠確定一下蛋白的磷酸化位點(diǎn). 請(qǐng)大家多多指教、探討！ |
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送鮮花一朵 4樓2012-08-24 14:38:15
mitocam
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-08-24 13:44:42
tianmaxk: 金幣+2, ★★★很有幫助, 非常感謝！追問(wèn)一下，一般用什么酶對(duì)磷酸化位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化？磷酸化位點(diǎn)只有一個(gè)能否檢測(cè)出來(lái)？ 2012-08-24 14:36:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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tianmaxk: 金幣+2, ★★★很有幫助, 非常感謝！追問(wèn)一下，一般用什么酶對(duì)磷酸化位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化？磷酸化位點(diǎn)只有一個(gè)能否檢測(cè)出來(lái)？ 2012-08-24 14:36:10
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試用一下PhosTag SDSPAGE，如果運(yùn)氣好，磷酸化的蛋白質(zhì)和未磷酸化的（用堿性磷酸化酶處理一下）同時(shí)跑膠，看看是否有明顯差異。我檢測(cè)過(guò)單個(gè)磷酸化位點(diǎn)的蛋白質(zhì)，分離的很好，很容易就區(qū)別出來(lái)了。也有蛋白質(zhì)無(wú)法分離的。 測(cè)定磷酸化位點(diǎn)，如果有條件可以用質(zhì)譜分析，分離到磷酸化肽測(cè)序。如果上述PhosTag方法可行，突變最可能的磷酸化位點(diǎn)，檢驗(yàn)是否點(diǎn)突變消除了磷酸化，這是一個(gè)苯方法。 |
2樓2012-08-24 04:43:19
mitocam
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3樓2012-08-24 04:51:06
mitocam
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5樓2012-08-24 16:23:26
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