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張玉杰銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
鏈霉菌轉(zhuǎn)化后 提質(zhì)粒驗證 出現(xiàn)質(zhì)粒上片段丟失的情況
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我構(gòu)建了一個 鏈霉菌的基因敲除載體，是雙交換的。載體上位點處依次連接有左臂L、抗性標(biāo)記K、右臂R 將載體轉(zhuǎn)入鏈霉菌之后，對初步得到的轉(zhuǎn)化子重新提質(zhì)粒，進(jìn)行驗證。 PCR發(fā)現(xiàn)，構(gòu)建到載體上的篩選標(biāo)記K丟失了，就是對這個片段 做PCR 沒有條帶。（載體上的抗性標(biāo)記A 依舊還有）。我不明白是什么原因。請各位大俠指教。 還有就是，這個片段，我用的是XbaI 酶切位點，依據(jù)我的片段測序結(jié)果，應(yīng)該沒有甲基化情況的發(fā)生。 請各位高人指點。謝謝 |
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2樓2012-10-25 11:06:03
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3樓2012-10-29 08:53:20
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4樓2013-01-07 10:40:14
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