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張玉杰銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
鏈霉菌轉化后 提質粒驗證 出現(xiàn)質粒上片段丟失的情況
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我構建了一個 鏈霉菌的基因敲除載體，是雙交換的。載體上位點處依次連接有左臂L、抗性標記K、右臂R 將載體轉入鏈霉菌之后，對初步得到的轉化子重新提質粒，進行驗證。 PCR發(fā)現(xiàn)，構建到載體上的篩選標記K丟失了，就是對這個片段 做PCR 沒有條帶。（載體上的抗性標記A 依舊還有）。我不明白是什么原因。請各位大俠指教。 還有就是，這個片段，我用的是XbaI 酶切位點，依據我的片段測序結果，應該沒有甲基化情況的發(fā)生。 請各位高人指點。謝謝 |
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