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保護(hù)你的大樹新蟲 (小有名氣)
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[求助]
western-blot 技術(shù)
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| 我現(xiàn)在在做western-blot,現(xiàn)在的圖片發(fā)現(xiàn)整個(gè)圖片呈現(xiàn)云霧狀,好像是一抗的濃度大了,我已經(jīng)把濃度降低了,但是發(fā)現(xiàn)還是呈現(xiàn)云霧狀,而且中間沒有相對特別亮的地方。我想問下,在做western的時(shí)候還需要注意什么,可以盡量詳細(xì)一點(diǎn),謝謝哈。 |
【分子生物】EPI帖 |
金蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
| 是黑的都糊成一片么?要么繼續(xù)降低濃度,要么使勁使勁洗洗試試,一抗二抗結(jié)束之后,不是都用PBST洗么。還有就是有時(shí)候用5%的牛奶做一抗孵育,能降低背景。第三,就是減少曝光時(shí)間,可以壓個(gè)幾秒的試試。第四就是你的轉(zhuǎn)膜,是不是真的轉(zhuǎn)過去了特異性的蛋白條帶,第五就是蛋白的load量。western是個(gè)很復(fù)雜很欺生的活,一個(gè)條件一個(gè)條件地摸索吧~祝你好運(yùn)~ |

新蟲 (小有名氣)
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