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保護你的大樹新蟲 (小有名氣)
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western-blot 技術(shù)
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| 我現(xiàn)在在做western-blot，現(xiàn)在的圖片發(fā)現(xiàn)整個圖片呈現(xiàn)云霧狀，好像是一抗的濃度大了，我已經(jīng)把濃度降低了，但是發(fā)現(xiàn)還是呈現(xiàn)云霧狀，而且中間沒有相對特別亮的地方。我想問下，在做western的時候還需要注意什么，可以盡量詳細一點，謝謝哈。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-08-25 20:09:43
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-08-25 20:09:43
| 是黑的都糊成一片么？要么繼續(xù)降低濃度，要么使勁使勁洗洗試試，一抗二抗結(jié)束之后，不是都用PBST洗么。還有就是有時候用5%的牛奶做一抗孵育，能降低背景。第三，就是減少曝光時間，可以壓個幾秒的試試。第四就是你的轉(zhuǎn)膜，是不是真的轉(zhuǎn)過去了特異性的蛋白條帶，第五就是蛋白的load量。western是個很復(fù)雜很欺生的活，一個條件一個條件地摸索吧~祝你好運~ |
3樓2012-08-25 19:31:57
5樓2012-08-25 23:44:43
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6樓2012-08-26 14:06:03
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8樓2012-08-26 22:14:25
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9樓2012-08-26 22:21:52
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