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| 我現(xiàn)在在做western-blot，現(xiàn)在的圖片發(fā)現(xiàn)整個(gè)圖片呈現(xiàn)云霧狀，好像是一抗的濃度大了，我已經(jīng)把濃度降低了，但是發(fā)現(xiàn)還是呈現(xiàn)云霧狀，而且中間沒(méi)有相對(duì)特別亮的地方。我想問(wèn)下，在做western的時(shí)候還需要注意什么，可以盡量詳細(xì)一點(diǎn)，謝謝哈。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-08-25 20:09:43
| 是黑的都糊成一片么？要么繼續(xù)降低濃度，要么使勁使勁洗洗試試，一抗二抗結(jié)束之后，不是都用PBST洗么。還有就是有時(shí)候用5%的牛奶做一抗孵育，能降低背景。第三，就是減少曝光時(shí)間，可以壓個(gè)幾秒的試試。第四就是你的轉(zhuǎn)膜，是不是真的轉(zhuǎn)過(guò)去了特異性的蛋白條帶，第五就是蛋白的load量。western是個(gè)很復(fù)雜很欺生的活，一個(gè)條件一個(gè)條件地摸索吧~祝你好運(yùn)~ |
3樓2012-08-25 19:31:57
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4樓2012-08-25 22:36:17
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