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脂氧合酶活性的測(cè)定的問題（葡萄） 已有1人參與
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各位大俠 我是測(cè)葡萄各組織器官的脂氧合酶 提取緩沖液用的是磷酸緩沖液（PH6.8 50mmol/L) ,其中含有1%的TritonX-100和4%PVP。 提取酶液的時(shí)候忘記預(yù)冷緩沖液了（這個(gè)關(guān)系大嗎？） 反應(yīng)緩沖液是醋酸緩沖液（pH5.4 100mmol/L） 反應(yīng)底物亞油酸（0.5%V/V），其中加了Tween-20，并滴加了NaOH 測(cè)酶活時(shí)用的就是經(jīng)典的3mL反應(yīng)體系(但是我的樣品有限，我就把體系縮到了1mL),由于現(xiàn)在是夏季，我沒有預(yù)熱（30℃）緩沖液和底物，在234nm處測(cè)定1分鐘內(nèi)的吸光值，完全沒有變化，哪位大俠遇到過類似情況 請(qǐng)指點(diǎn)下 看看是哪一步出了問題 是酶液太少?zèng)]反應(yīng)還是很快反應(yīng)完了所以沒變化？？？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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silicare: 金幣+3, BioEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 經(jīng)驗(yàn)之談，值得借鑒 2012-08-31 18:20:02
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首先測(cè)定的時(shí)候必須將緩沖液預(yù)熱到測(cè)定溫度，其次是你可以將反應(yīng)讀數(shù)時(shí)間設(shè)定的時(shí)間間隔調(diào)節(jié)為每10或者20秒讀數(shù)一次，看看有沒有讀數(shù)變化，這樣做的話再?zèng)]有讀數(shù)變化的話就要考慮是否有酶活或者是測(cè)定方法的適宜與否了 這是我從測(cè)定很多酶活的過程中得出的結(jié)論，希望對(duì)你及很多測(cè)定酶活遇到難題的人有幫助。 |
3樓2012-08-31 09:57:34
lihaitao321
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