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脂氧合酶活性的測定的問題(葡萄) 已有1人參與
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各位大俠 我是測葡萄各組織器官的脂氧合酶 提取緩沖液用的是磷酸緩沖液(PH6.8 50mmol/L) ,其中含有1%的TritonX-100和4%PVP。 提取酶液的時候忘記預(yù)冷緩沖液了(這個關(guān)系大嗎?) 反應(yīng)緩沖液是醋酸緩沖液(pH5.4 100mmol/L) 反應(yīng)底物亞油酸(0.5%V/V),其中加了Tween-20,并滴加了NaOH 測酶活時用的就是經(jīng)典的3mL反應(yīng)體系(但是我的樣品有限,我就把體系縮到了1mL),由于現(xiàn)在是夏季,我沒有預(yù)熱(30℃)緩沖液和底物,在234nm處測定1分鐘內(nèi)的吸光值,完全沒有變化,哪位大俠遇到過類似情況 請指點(diǎn)下 看看是哪一步出了問題 是酶液太少沒反應(yīng)還是很快反應(yīng)完了所以沒變化??? |
新蟲 (初入文壇)
木蟲 (著名寫手)
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首先測定的時候必須將緩沖液預(yù)熱到測定溫度,其次是你可以將反應(yīng)讀數(shù)時間設(shè)定的時間間隔調(diào)節(jié)為每10或者20秒讀數(shù)一次,看看有沒有讀數(shù)變化,這樣做的話再沒有讀數(shù)變化的話就要考慮是否有酶活或者是測定方法的適宜與否了 這是我從測定很多酶活的過程中得出的結(jié)論,希望對你及很多測定酶活遇到難題的人有幫助。 |
至尊木蟲 (文壇精英)
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