添翼如虎

新蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 155.5
帖子: 65
在線: 17.6小時(shí)
蟲號(hào): 1810507
注冊(cè): 2012-05-11
專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)

[交流] ＰＣＲ儀做連接已有8人參與

弱弱的問(wèn)一下，用ＰＣＲ儀做連接，16攝氏度過(guò)夜，程序怎么設(shè)置呀？PCR儀連續(xù)開一晚上可以嗎？小妹這是第一次做克隆，實(shí)驗(yàn)室也沒(méi)人做過(guò)，沒(méi)經(jīng)驗(yàn)啊

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

數(shù)一英一271專碩（085401）求調(diào)劑，可跨已經(jīng)有8人回復(fù)
295求調(diào)劑已經(jīng)有4人回復(fù)
0856求調(diào)劑已經(jīng)有5人回復(fù)
材料學(xué)碩333求調(diào)劑已經(jīng)有10人回復(fù)
299求調(diào)劑已經(jīng)有6人回復(fù)
一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑已經(jīng)有6人回復(fù)
289求調(diào)劑已經(jīng)有12人回復(fù)
070305高分子化學(xué)與物理 304分求調(diào)劑已經(jīng)有6人回復(fù)
0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收已經(jīng)有10人回復(fù)
各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩已經(jīng)有5人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

大家做酶切或者逆轉(zhuǎn)錄時(shí)pcr儀蓋子溫度設(shè)為多少？已經(jīng)有9人回復(fù)
載體連接pcr片段一直連不上已經(jīng)有17人回復(fù)
連接后轉(zhuǎn)化子PCR出現(xiàn)非特異性的條帶已經(jīng)有10人回復(fù)
PCR ，雙酶切，連接問(wèn)題已經(jīng)有17人回復(fù)
為什么不同PCR儀擴(kuò)增結(jié)果不同已經(jīng)有7人回復(fù)
連接轉(zhuǎn)化后菌落PCR驗(yàn)證出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增已經(jīng)有5人回復(fù)
PCR產(chǎn)物與T載體連不上求助已經(jīng)有29人回復(fù)
該選哪個(gè)熒光定量PCR儀，ABI的stepone plus 和 Biorad的cfx96，用過(guò)的指點(diǎn)一下已經(jīng)有23人回復(fù)
關(guān)于PCR產(chǎn)物與pMD 19Tsimple連接的問(wèn)題已經(jīng)有19人回復(fù)
【求助/交流】國(guó)產(chǎn)PCR儀怎么樣？已經(jīng)有9人回復(fù)
【求助/交流】pGEM-T Easy載體 T-A 連接為啥沒(méi)連入PCR產(chǎn)物的菌斑是藍(lán)斑已經(jīng)有23人回復(fù)
【求助/交流】為什么我的PCR產(chǎn)物總是連接不上T載體已經(jīng)有26人回復(fù)
【求助/交流】做連接后的質(zhì)粒是否可以用來(lái)做pcr 已經(jīng)有10人回復(fù)
【求助/交流】連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后菌落PCR正確，提取的質(zhì)粒卻比空質(zhì)粒還�。� 已經(jīng)有4人回復(fù)
【求助/交流】PCR問(wèn)題求解，2段基因連接已經(jīng)有13人回復(fù)
【求助/交流】連接產(chǎn)物，是否可以直接做PCR模板？已經(jīng)有17人回復(fù)
【求助/交流】pcr,酶切，連接，哪步可以省？已經(jīng)有13人回復(fù)

1樓 2012-09-24 10:45:01

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

foxcl

鐵蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
金幣: 2025.2
散金: 4
紅花: 3
帖子: 359
在線: 60.4小時(shí)
蟲號(hào): 1257868
注冊(cè): 2011-04-07
專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)

★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
rainwander: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-09-24 14:12:34

我是設(shè)１６度，３０min，２４個(gè)循環(huán)，總１２個(gè)小時(shí)。

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2012-09-24 11:16:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

547star

木蟲 (著名寫手)

MicEPI: 1
應(yīng)助: 184 (高中生)
金幣: 4273
散金: 271
紅花: 14
帖子: 1308
在線: 986.6小時(shí)
蟲號(hào): 67494
注冊(cè): 2005-05-07
專業(yè): 系統(tǒng)生物學(xué)

★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
rainwander: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-09-24 14:12:41

半導(dǎo)體制冷效率很低，而且容易壞。很多PCR儀器就是因?yàn)樽鲞B接把半導(dǎo)體制冷片燒壞而不能用的。不建議用PCR儀做低溫連接反應(yīng)。沒(méi)有低溫水浴，用的小泡沫箱做16度水浴密封好放4度冰箱還好些。

贊一下

回復(fù)此樓

為什么

3樓2012-09-24 11:28:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

小河彎彎07

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
金幣: 469.8
散金: 20
紅花: 1
帖子: 213
在線: 88.8小時(shí)
蟲號(hào): 1920611
注冊(cè): 2012-08-02
性別: MM
專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)

★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
scelab: 金幣+2, 這也行？！載體和片段分別多大？ 2012-09-24 14:21:20

做連接不用那么長(zhǎng)吧？我都是16度2小時(shí)啊~
載體pMD18T,片段500-700bp

[ Last edited by 小河彎彎07 on 2012-9-24 at 15:50 ]

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2012-09-24 14:04:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

MicEPI: 1
應(yīng)助: 1662 (講師)
金幣: 8693.8
紅花: 72
帖子: 3516
在線: 456小時(shí)
蟲號(hào): 1614001
注冊(cè): 2012-02-13
專業(yè): 生物化學(xué)

★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking: 金幣+3, 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖交流，歡迎道生物醫(yī)藥區(qū) 2012-09-24 21:33:26

可以設(shè)定為16度99小時(shí)，第二天來(lái)了終止程序就可以了。PCR儀一直開著沒(méi)什么問(wèn)題。要注意的是一般PCR儀為了防止程序過(guò)程中溶液蒸發(fā)，是從頂部加熱的，預(yù)設(shè)溫度一般是超過(guò)100度的。如果做鏈接，最好不要這么高，如果是可以調(diào)的話，弄個(gè)室溫就行了。

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2012-09-24 15:35:35

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

trizol11

木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 47 (小學(xué)生)
金幣: 2714.2
散金: 199
紅花: 3
帖子: 572
在線: 172.8小時(shí)
蟲號(hào): 1711824
注冊(cè): 2012-03-23
性別: GG
專業(yè): 獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)

★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
rainwander: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-09-25 16:56:11

直接設(shè)置16度，forever保存，可以了。過(guò)夜 16小時(shí)。時(shí)間短連接效果不好

贊一下

回復(fù)此樓

任重道遠(yuǎn)……

6樓2012-09-24 20:34:51

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
散金: 12
紅花: 3
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號(hào): 859607
注冊(cè): 2009-09-29
性別: GG
專業(yè): 生物技術(shù)藥物

★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流問(wèn)題。 2012-09-24 21:33:37

看來(lái)都是有錢人啊，PCR儀做鏈接？！一個(gè)水浴鍋才多錢啊，不行就買個(gè)金屬浴的小件，再不行就樓上說(shuō)的大泡沫盒子，裝滿水調(diào)到16℃，膠帶密封，重物壓緊，或者干脆4℃時(shí)間長(zhǎng)一些連接。

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2012-09-24 21:21:32

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

MicEPI: 1
應(yīng)助: 1662 (講師)
金幣: 8693.8
紅花: 72
帖子: 3516
在線: 456小時(shí)
蟲號(hào): 1614001
注冊(cè): 2012-02-13
專業(yè): 生物化學(xué)

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

其實(shí)連接條件沒(méi)那么苛刻，室溫過(guò)夜也沒(méi)什么關(guān)系。如果是粘性末端，我都是連一兩個(gè)小時(shí)就做轉(zhuǎn)化了。

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2012-09-25 12:38:30

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

ilyzp

銅蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
金幣: 70.8
紅花: 2
帖子: 42
在線: 7.1小時(shí)
蟲號(hào): 2032737
注冊(cè): 2012-09-27
性別: MM
專業(yè): 蔬菜學(xué)與瓜果學(xué)

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

PCR過(guò)夜運(yùn)行對(duì)機(jī)子損傷很大，還是不要這樣了，可以放在4度冰箱過(guò)夜，或者拿一個(gè)保溫杯裝上冰塊和水調(diào)一下溫度，這個(gè)很容易解決的

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2012-09-27 11:05:03

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

bragren123

木蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 8 (幼兒園)
金幣: 2663.1
散金: 30
紅花: 1
帖子: 255
在線: 57.1小時(shí)
蟲號(hào): 113925
注冊(cè): 2005-11-23
性別: GG
專業(yè): 植物學(xué)

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

PCR儀可以做連接，但我一般不建議學(xué)生來(lái)做，對(duì)儀器損傷較大。如要做，要把熱蓋關(guān)掉，不然不利于連接。

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2012-12-28 13:27:35

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 學(xué)碩274求調(diào)劑 +9	Li李魚 2026-03-26	9/450	2026-03-28 21:42 by bymhappy
[考研] 一志愿廈門大學(xué)化學(xué)學(xué)碩307求調(diào)劑 +10	y7czhao 2026-03-26	10/500	2026-03-28 14:23 by 唐沐兒
[考研] 347求調(diào)劑 +3	山頂見(jiàn)α 2026-03-25	3/150	2026-03-28 14:13 by 唐沐兒
[考研] 藥學(xué)105500求調(diào)劑 +3	Ssun。。 2026-03-28	3/150	2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6	烤麥芽 2026-03-27	8/400	2026-03-28 10:40 by 烤麥芽
[考研] 085405 考的11408求各位老師帶走 +3	Qiu學(xué)ing 2026-03-28	3/150	2026-03-28 09:19 by 樂(lè)呵呵的追夢(mèng)人
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9	大饞小子 2026-03-27	9/450	2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 322求調(diào)劑 +4	我真的很想學(xué)習(xí) 2026-03-23	4/200	2026-03-27 13:51 by 楊楊楊紫
[考研] 材料求調(diào)劑 +5	.m.. 2026-03-25	5/250	2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 324求調(diào)劑 +8	hanamiko 2026-03-26	10/500	2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4	崔wj 2026-03-26	4/200	2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 294分080500材料科學(xué)與工程求調(diào)劑 +4	柳溪邊 2026-03-26	4/200	2026-03-26 21:14 by XPU李慶
[考研] 321求調(diào)劑 +6	wasdssaa 2026-03-26	6/300	2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 352求調(diào)劑 +4	大米飯！ 2026-03-22	4/200	2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科學(xué)與工程 317求調(diào)劑 +4	JKSOIID 2026-03-26	4/200	2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3	江往賣魚 2026-03-26	3/150	2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4	yqdszhdap－ 2026-03-22	5/250	2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3	akrrain 2026-03-24	3/150	2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[基金申請(qǐng)] 請(qǐng)教下大家 2026年國(guó)家基金申請(qǐng)是雙盲審嗎？ +3	lishucheng1 2026-03-22	5/250	2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 280分求調(diào)劑一志愿085802 +4	PUMPT 2026-03-22	7/350	2026-03-22 22:13 by 星空星月