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huangyan0517金蟲 (小有名氣)
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[求助]
sds電泳拖尾，求原因
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如圖，條帶有些拖尾，跑的是溶菌酶單體、二聚體、多聚體混合液，濃縮膠5%，分離膠15%，2倍上樣buffer混合樣品成一倍，每孔15ul，問(wèn)題可能出在哪？分離膠tris測(cè)ph6.8，和要求的6.8基本一致，分離膠tris8.9，和要求8.8有點(diǎn)差別，問(wèn)題大嗎？電泳設(shè)置為80v，20min，120v，50min。搞不明白哪里出問(wèn)題，另外灌完分離膠，我都是用1000ul的槍，加滿封閉，管濃縮膠時(shí)水也有點(diǎn)殘留，另外別人說(shuō)加aps和temed要抽空氣，難道真是這個(gè)原因？求高人指點(diǎn) 九月濃縮.jpg |
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cicelyzh
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4樓2012-10-08 14:39:37
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-08 14:07:31
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-08 14:07:31
| 分離膠的Tris的pH是挺重要的，不準(zhǔn)可能造成條帶不sharp。灌好分離膠封閉不必加滿，只要有大約0.5-1cm就行了，加的時(shí)候要緩慢均勻。做濃縮膠的時(shí)候盡量把水弄干，不過(guò)有一點(diǎn)點(diǎn)應(yīng)該問(wèn)題不大的。抽空氣是為了減少溶液中的氧氣含量，氧氣會(huì)抑制膠的聚合。不抽也沒(méi)多少關(guān)系，很多人只是稍稍多加一點(diǎn)點(diǎn)APS和TEMED。只要你的膠不是凝得特別慢就沒(méi)必要抽氣。不知道你的上樣量是多少，有時(shí)候樣品沒(méi)處理好也會(huì)造成拖尾。 |
2樓2012-10-08 13:51:41
huangyan0517
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3樓2012-10-08 14:32:11
5樓2012-10-08 18:12:13
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