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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 酶的分離純化
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zhangpamela木蟲 (小有名氣)
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[求助]
酶的分離純化
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| 我要純化一種從細菌提取出來的未知粗酶，鹽析后上離子交換，等電點未知，我準備選用DEAE-sephroseFF 填料試一試，但不知道選什么緩沖液，pH調為多少？不知道這種填料合適不？100ml的填料能用幾次？還挺貴的，一般這種未知的是首選陰離子呢還是陽離子？ |
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【答案】應助回帖
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先做粗酶液pH穩(wěn)定性的實驗，確定了穩(wěn)定范圍之后再選擇層析柱。 Effect of pH and temperature on glucoamylase activity and stability The effect of pH on glucoamylase activity is measuring glucoamylase activity at different pH value of pH 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0 at 37ºC. The effect of temperature on glucoamylase activity is measuring glucoamylase activity at different temperature of 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 and 60ºC at optimum pH. The effect of pH on glucoamylase stability was conducted by mixing 0.1mL enzyme with 0.9mL 0.1M buffer in different pH value (The buffers used were: citrate-phosphate buffer, pH 3.0–7.0; sodium-phosphate buffer, pH 6.0–8.0; Tris-HCl buffer, pH 7.0–9.0; and glycine-NaOH buffer, pH 8.5–12.0). The mixtures were incubated at 4ºCfor 24h, and the residue enzyme activity were measured. The effect of temperature on enzyme stability was conducted by incubating enzyme at 30, 35, 40, 45, and 50ºC for 1 h, and the residue enzyme activity were measured. Each result of the character assay was showed by a scatter diagram with trend line, the highest activity was defined as 100%, other activity was defined as relative activity. The error bars represent the standard deviation of triplicate measurements. |
3樓2012-10-20 15:42:34
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4樓2012-10-20 15:46:44
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