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不鳴鳥(niǎo)

木蟲(chóng) (正式寫手)

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[求助] 求助設(shè)計(jì)引物加兩個(gè)酶切位點(diǎn)

要擴(kuò)增一段1.6~1.7kb左右的目的基因，篩選出了一對(duì)效果比較好的引物：
上游：5‘-GTGATTATTCATTTCGGAGGGTG-3’
下游：5‘-CAGGGTTCTTAATACATACATTGCT-3’
現(xiàn)在不想用T載體的酶切位點(diǎn)，想用simple T  克隆。在目的基因5’端加X(jué)baI 酶切位點(diǎn)，3‘端加SalI酶切位點(diǎn)
SalI識(shí)別位點(diǎn)  5’-G’‘TCGAC-3'
                     3'-CAGCT,G-5'
XbaI識(shí)別位點(diǎn) 5‘-T’‘CTAGA-3’
                     3‘-AGATC,T-5'

請(qǐng)指導(dǎo)一下具體怎么加，需要加保護(hù)堿基嗎
或者教給我方法，有資料也可以
新手先謝謝啦

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1樓 2012-11-02 13:47:05

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wangqi20092

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
不鳴鳥(niǎo): 金幣+2 2012-11-06 07:38:57

上游引物直接加上就行了，下游引物記得也是5‘-3’的方向，別搞錯(cuò)了，具體可以百度查看酶切位點(diǎn)表，酶切位點(diǎn)都是加在5’端。

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9樓2012-11-05 14:43:49

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zhlf1989513

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
不鳴鳥(niǎo): 金幣+2 2012-11-06 07:38:03

加保護(hù)堿基http://www.dxy.cn/bbs/topic/2574 ... 4%E7%A2%B1%E5%9F%BA

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keepon

2樓2012-11-02 14:05:57

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不鳴鳥(niǎo)

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引用回帖:

2樓: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-02 14:05:57
加保護(hù)堿基http://www.dxy.cn/bbs/topic/2574172?keywords=%E4%BF%9D%E6%8A%A4%E7%A2%B1%E5%9F%BA

請(qǐng)教一下這個(gè)具體加到引物序列上是怎么加的，兩個(gè)酶切位點(diǎn)加到哪

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3樓2012-11-02 14:13:07

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draco1987

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-11-05 20:13:46
不鳴鳥(niǎo): 金幣+2 2012-11-06 07:38:23

酶切位點(diǎn)當(dāng)然要加在引物序列前面咯，也就是加在引物的5’端。保護(hù)堿基要查一下，樓上說(shuō)過(guò)了。
不過(guò)樓主要注意啊，simple T有的也是有酶切位點(diǎn)的，我印象里Takara的pMD19-T simple本身就帶了XbaI的酶切位點(diǎn)。

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4樓2012-11-02 15:51:28

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