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clflying金蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR問題求助！
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| 提出的基因組進(jìn)行PCR，至今無法出條帶，溫度梯度和濃度梯度都做了，之前用師兄做好的重組質(zhì)粒來P是能夠P出來的，引物和條件都是一樣的，區(qū)別就是一個(gè)用的是重組質(zhì)粒，一個(gè)用的是提出的基因組，但是基因組已經(jīng)提過3次，試劑也都換了新的，不知道什么原因，請教各位大神！ |
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phoenix2
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
clflying: 金幣+2, 博學(xué)EPI+1, ★有幫助, 謝謝。 2012-11-22 16:48:14
clflying: 金幣+2, 博學(xué)EPI+1, ★有幫助, 謝謝。 2012-11-22 16:48:14
| 基因組擴(kuò)PCR首先就是要注意濃度問題，基因組濃度不能太高，一般我們用試劑盒提出來以后都會稀釋100-300倍，再用作模板，2就是內(nèi)含子問題，基因組有內(nèi)含子，看看內(nèi)含子有多長，內(nèi)含子過大也會影響PCR結(jié)果，3重組質(zhì)粒相對濃度很高的，所以可能比較好P，可以試試2次PCR，4GC含量也是個(gè)問題，你可以試試GC buffer I,II, 再搭配相應(yīng)的酶試試。不知道能不能幫到你。 |
3樓2012-11-21 17:15:59
8171532
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2樓2012-11-21 15:27:51
4樓2012-11-22 09:36:42
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