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clflying金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
PCR問(wèn)題求助！
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| 提出的基因組進(jìn)行PCR，至今無(wú)法出條帶，溫度梯度和濃度梯度都做了，之前用師兄做好的重組質(zhì)粒來(lái)P是能夠P出來(lái)的，引物和條件都是一樣的，區(qū)別就是一個(gè)用的是重組質(zhì)粒，一個(gè)用的是提出的基因組，但是基因組已經(jīng)提過(guò)3次，試劑也都換了新的，不知道什么原因，請(qǐng)教各位大神！ |
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phoenix2
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
clflying: 金幣+2, 博學(xué)EPI+1, ★有幫助, 謝謝。 2012-11-22 16:48:14
clflying: 金幣+2, 博學(xué)EPI+1, ★有幫助, 謝謝。 2012-11-22 16:48:14
| 基因組擴(kuò)PCR首先就是要注意濃度問(wèn)題，基因組濃度不能太高，一般我們用試劑盒提出來(lái)以后都會(huì)稀釋100-300倍，再用作模板，2就是內(nèi)含子問(wèn)題，基因組有內(nèi)含子，看看內(nèi)含子有多長(zhǎng)，內(nèi)含子過(guò)大也會(huì)影響PCR結(jié)果，3重組質(zhì)粒相對(duì)濃度很高的，所以可能比較好P，可以試試2次PCR，4GC含量也是個(gè)問(wèn)題，你可以試試GC buffer I,II, 再搭配相應(yīng)的酶試試。不知道能不能幫到你。 |
3樓2012-11-21 17:15:59
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2樓2012-11-21 15:27:51
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4樓2012-11-22 09:36:42
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