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bupashibai

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[交流] 大家都是用什么方法提細(xì)菌基因組呢（文庫(kù)用）

構(gòu)建基因文庫(kù)用的，最好具體點(diǎn)。。。

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1樓 2012-11-24 21:37:34

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hraikeyan

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7樓: Originally posted by jl860822 at 2012-11-26 08:57:49
需要的片段是多大的，如果需要40kb左右的片段的話，建議你自己提取，如果你需要20kb以上的虎，試劑盒就可以的

我現(xiàn)在試了酚氯仿提取的方法，先用溶菌酶處理，離心后，上清加異丙醇沉淀，然后沉淀再用酚氯仿抽提，最后用乙醇洗滌�？墒窃诋惐汲恋砟且徊皆趺匆矝](méi)有絲狀物出現(xiàn)，是什么原因啊？都提了好多次了，開(kāi)始懷疑是菌量問(wèn)題，可是不管怎么調(diào)整都是這個(gè)結(jié)果。

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8樓2012-11-26 09:30:28

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qhuzhl

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試劑盒，如寶生物等品牌都有

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2樓2012-11-25 12:20:03

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wsh01300

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看文庫(kù)大小，柱式DNA提取試劑盒提取的基因組DNA大小在15kb以上，要更大的基因基DNA的話要用溶液型的試劑盒。

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3樓2012-11-25 14:23:15

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德國(guó)工兵鏟

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試劑盒，現(xiàn)在很多公司都有細(xì)菌基因組提取試劑盒，你可以針對(duì)你要提的東西咨詢(xún)生物公司，他們會(huì)推薦合適的產(chǎn)品

[ Last edited by 德國(guó)工兵鏟 on 2012-11-25 at 17:47 ]

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4樓2012-11-25 17:45:32

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孤星殘?jiān)?/a>

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用溶菌酶裂解細(xì)胞，后酚氯仿提取吧

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5樓2012-11-25 22:59:15

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Myrainy1020

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感覺(jué)傳統(tǒng)的酚氯仿提取還是比較好的，不用特殊儀器，又便宜，只要細(xì)心點(diǎn)，提取的質(zhì)量還是比較好的。

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6樓2012-11-25 23:14:25

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jl860822

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bupashibai: 金幣+1, 專(zhuān)業(yè) 2012-11-26 16:24:43

需要的片段是多大的，如果需要40kb左右的片段的話，建議你自己提取，如果你需要20kb以上的虎，試劑盒就可以的

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7樓2012-11-26 08:57:49

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那你跑膠鑒定結(jié)果呢？有沒(méi)有條帶？有些時(shí)候是看不清楚的，或者說(shuō)你的菌量少了點(diǎn)

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9樓2012-11-26 10:23:55

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yongbo_liang

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我們使用磁球提取DNA，方便，快，沒(méi)有有機(jī)試劑，提取效果和得率也可以。

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10樓2012-11-26 11:36:01

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bupashibai

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3樓: Originally posted by wsh01300 at 2012-11-25 14:23:15
看文庫(kù)大小，柱式DNA提取試劑盒提取的基因組DNA大小在15kb以上，要更大的基因基DNA的話要用溶液型的試劑盒。

可以推薦款試劑盒么，我用那種普通的生工的試劑盒貌似不可以。。。。

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12樓2012-11-26 16:35:30

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bupashibai

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6樓: Originally posted by Myrainy1020 at 2012-11-25 23:14:25
感覺(jué)傳統(tǒng)的酚氯仿提取還是比較好的，不用特殊儀器，又便宜，只要細(xì)心點(diǎn)，提取的質(zhì)量還是比較好的。

恩，先試試。。。

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13樓2012-11-26 16:35:56

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bupashibai

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10樓: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-26 11:36:01
我們使用磁球提取DNA，方便，快，沒(méi)有有機(jī)試劑，提取效果和得率也可以。

提個(gè)DNA我們小碩怎么好意思買(mǎi)那種試劑盒。。。

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14樓2012-11-26 16:38:05

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weigh1111

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我們的方法比較暴力，是液氮磨一下，TE溶出來(lái)，酚抽醇沉

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15樓2012-11-26 17:30:39

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zhengli123

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先用酚氯仿抽提試試，不行就買(mǎi)試劑盒

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16樓2012-11-27 08:59:53

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hu6704526

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提取過(guò)程中不一定都有絮狀沉淀出現(xiàn)的，按照既定的步驟往下操作就可以。

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17樓2012-11-27 12:30:29

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yongbo_liang

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14樓: Originally posted by bupashibai at 2012-11-26 16:38:05

提個(gè)DNA我們小碩怎么好意思買(mǎi)那種試劑盒。。。...

那也沒(méi)什么啊，價(jià)格也不貴，而且方便好用。

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18樓2012-11-27 14:00:46

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happy!?

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感覺(jué)提取的條件也會(huì)有影響的吧！

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19樓2012-11-27 14:43:39

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fddyn

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8樓: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-26 09:30:28
我現(xiàn)在試了酚氯仿提取的方法，先用溶菌酶處理，離心后，上清加異丙醇沉淀，然后沉淀再用酚氯仿抽提，最后用乙醇洗滌。可是在異丙醇沉淀那一步怎么也沒(méi)有絲狀物出現(xiàn)，是什么原因啊？都提了好多次了，開(kāi)始懷疑是菌量 ...

加異丙醇醇沉不一定會(huì)出現(xiàn)絲狀物，你可以醇沉一個(gè)小時(shí)后離心，離心后在管底壁上能看到dna沉淀

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20樓2012-11-27 21:15:33

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9樓: Originally posted by jl860822 at 2012-11-26 10:23:55
那你跑膠鑒定結(jié)果呢？有沒(méi)有條帶？有些時(shí)候是看不清楚的，或者說(shuō)你的菌量少了點(diǎn)

用于篩選基因文庫(kù)所用的96孔板有什么要求嗎？需要多大的體積？尖底還是平底？

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21樓2012-12-20 18:48:41

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21樓: Originally posted by hraikeyan at 2012-12-20 18:48:41
用于篩選基因文庫(kù)所用的96孔板有什么要求嗎？需要多大的體積？尖底還是平底？...

我以前買(mǎi)的是Corning的

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22樓2012-12-20 20:55:35

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22樓: Originally posted by jl860822 at 2012-12-20 20:55:35
我以前買(mǎi)的是Corning的...

這個(gè)貴嗎？我在網(wǎng)上查了一下一個(gè)大概是16元。有這么貴嗎？

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23樓2012-12-21 09:15:17

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hp800953

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mobio 試劑盒

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24樓2012-12-21 12:30:55

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23樓: Originally posted by hraikeyan at 2012-12-21 09:15:17
這個(gè)貴嗎？我在網(wǎng)上查了一下一個(gè)大概是16元。有這么貴嗎？...

你可以買(mǎi)國(guó)產(chǎn)，只要1/3的價(jià)格

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25樓2012-12-21 15:23:05

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文庫(kù)構(gòu)建

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提DNA用于構(gòu)建文庫(kù)，必須要提出高質(zhì)量的DNA。這樣插入片段100kb左右

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26樓2013-10-14 09:01:42

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liqing4214

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8樓: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-26 09:30:28
我現(xiàn)在試了酚氯仿提取的方法，先用溶菌酶處理，離心后，上清加異丙醇沉淀，然后沉淀再用酚氯仿抽提，最后用乙醇洗滌�？墒窃诋惐汲恋砟且徊皆趺匆矝](méi)有絲狀物出現(xiàn)，是什么原因啊？都提了好多次了，開(kāi)始懷疑是菌量 ...

我也覺(jué)得是菌量，也就是DNA濃度沒(méi)上去，多重復(fù)試試

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回復(fù)此樓

27樓2013-10-14 15:01:15

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簡(jiǎn)單回復(fù)

bupashibai11樓

2012-11-26 16:34 回復(fù)

引用回帖:

2樓: Originally posted by qhuzhl at 2012-11-25 12:20:03 試劑盒，如寶生物等品牌都有

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