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1樓 2012-11-30 19:27:36

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5樓: Originally posted by aoda123 at 2012-12-01 15:33:17
質(zhì)譜能確定蛋白膠中條帶的蛋白分子量嗎？...

能啊，用maldi-tof就能知道蛋白質(zhì)的分子量啊~

6樓2012-12-01 16:13:38

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cicelyzh

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4樓: Originally posted by aoda123 at 2012-12-01 15:32:32
我想把蛋白電泳膠切下來送去做質(zhì)譜，看一下表達條帶是不是目的條帶...

想看表達條帶是否正確，先從分子量上大致判斷。你表達的蛋白如果有標簽，可以做Western進一步判斷。

7樓2012-12-02 03:19:22

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cicelyzh

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8樓: Originally posted by aoda123 at 2012-12-02 15:07:32
表達出來的蛋白比理論值大了十幾KD，構(gòu)建的質(zhì)粒測序也合適。做出來的western blot 又出現(xiàn)了其他條帶。就是不能確定表達的是不是目的條帶...

大十幾KD的確有些不正常。如果帶標簽可以看看能否純化出來。當(dāng)然你切帶打個質(zhì)譜也是不錯的選擇。

9樓2012-12-03 02:58:24

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xiangquanju

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小丹木木: 金幣+2, 股了交流 2012-12-03 16:36:58

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你的蛋白還有二硫鍵么，我之前看過一篇文獻，寫的是一個蛋白的的氧化態(tài)比還原態(tài)在SDS膠上要移動的慢一些，但是因為你的只有一條條帶的話，就不太好說。
所以最好最好做個質(zhì)譜檢測一下。
直接用刀片將目的條帶切下來，再和你要去做質(zhì)譜的地方聯(lián)系一下，需要怎么處理樣品。我之前做的就直接將切下來的樣品送過去就是了

10樓2012-12-03 13:41:29

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lanziliuli

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做串聯(lián)質(zhì)譜的話，蛋白還是要純的，復(fù)雜度不能太高，不然就要做LC-MSMS

做好科研

11樓2012-12-06 10:38:58

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cicelyzh

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我想很多人都做過，不知道你要問什么。

2樓2012-12-01 08:34:15

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額……沒見你的問題啊……好歹把遇到的問題寫在帖子里啊……

3樓2012-12-01 13:27:55

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 08:34:15
我想很多人都做過，不知道你要問什么。

我想把蛋白電泳膠切下來送去做質(zhì)譜，看一下表達條帶是不是目的條帶

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4樓2012-12-01 15:32:32

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3樓: Originally posted by weigh1111 at 2012-12-01 13:27:55
額……沒見你的問題啊……好歹把遇到的問題寫在帖子里啊……

質(zhì)譜能確定蛋白膠中條帶的蛋白分子量嗎？

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5樓2012-12-01 15:33:17

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7樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-02 03:19:22
想看表達條帶是否正確，先從分子量上大致判斷。你表達的蛋白如果有標簽，可以做Western進一步判斷。...

表達出來的蛋白比理論值大了十幾KD，構(gòu)建的質(zhì)粒測序也合適。做出來的western blot 又出現(xiàn)了其他條帶。就是不能確定表達的是不是目的條帶