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glgno1新蟲 (初入文壇)
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[求助]
各位前輩我想請(qǐng)教下關(guān)于基因克隆的問題，急！
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| 各位前輩我想請(qǐng)教下關(guān)于基因克隆的問題。本人通過RACE法擴(kuò)出3800bp的一段序列，當(dāng)然是通過3'和5’RACE分別擴(kuò)增的，但是當(dāng)我把兩端擴(kuò)增的片段連接的全長(zhǎng)放到開放閱讀框里檢驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)長(zhǎng)的編碼區(qū)，我想知道是拼的時(shí)候有誤差還是存在有兩個(gè)開放閱讀框的基因，請(qǐng)各位指點(diǎn) 非常感謝 |
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gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-12-07 13:30:11
glgno1: 金幣+1 2012-12-11 12:57:24
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glgno1: 金幣+1 2012-12-11 12:57:24
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你可能還需要做進(jìn)一步的驗(yàn)證，在你克隆的序列的兩頭設(shè)計(jì)引物，然后你cDNA為模板擴(kuò)增序列，克隆到T載體后送去測(cè)序，確保你RACE到的序列是真實(shí)，準(zhǔn)確和完整。 在你這一步，序列驗(yàn)證無誤后，接下來再做ORF分析，否則第一步序列沒驗(yàn)證好，后面的實(shí)驗(yàn)就缺乏堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 |
2樓2012-12-06 22:41:01
3樓2012-12-07 05:46:16
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