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冰凝草木蟲 (小有名氣)
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[求助]
不知道為什么用豬的腸道的cDNA 一直都無法PCR出目的條帶
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最近一直在努力從豬的腸道的cDNA 中PCR出目的條帶，是APN這個基因的條帶，一開始的時候是使用的DNA，但是由于設(shè)計的引物是以mRNA為依據(jù)的，所以后來開始換用RNA反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA，目的條帶不是很大，只有3Kb左右，是一開始設(shè)計的全長的引物，但是沒有結(jié)果，所以設(shè)計了兩段只有500bp 大小的引物，都成功的PCR出目的條帶了，鑒定也是對的，所以就又重新設(shè)計兩段1.5Kb 的引物，為了做重疊PCR，但是還是沒有結(jié)果。 最后設(shè)計的引物的上下游的Tm值相差較大，但是試了48、53、55、57、59之后都是沒有條帶，不知道是什么原因呢？ |
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joan198108
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