 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1856 | 回復(fù): 12 | |||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
[交流]
關(guān)于原核表達(dá)問題 已有4人參與
|
|||||
|
現(xiàn)將載體構(gòu)建好了，但不知道接下來怎么做？載體是pET28a 檢測(cè)都合適了，現(xiàn)在想跑個(gè)sds–page 但不知道怎么做？ 要把檢測(cè)合適的構(gòu)建好的重組DNA挑斑搖菌，然后用IPTG誘導(dǎo)？這個(gè)誘導(dǎo)劑濃度是多少？ 然后就離心取上清跑SDS–PAGE？ 還是怎么做？ 跑出的膠怎么分析？跑膠用的marker 是多少？ 最后怎么算自己的目的蛋白是多大呢？ 本人是一塌糊涂 請(qǐng)大家給予多多的意見和資料 謝謝 謝謝 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有276人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 原核表達(dá)引物設(shè)計(jì)的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 做原核表達(dá)又出現(xiàn)問題了
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 做原核表達(dá)引物設(shè)計(jì)的有關(guān)問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 蛋白激酶原核表達(dá)
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 原核表達(dá)，蛋白活性問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 原核表達(dá) pET32a和pET30a Western blot問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 原核表達(dá)的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 關(guān)于用Ni-NTA His.bind樹脂純化原核表達(dá)蛋白
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 原核表達(dá)問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 有關(guān)蛋白表達(dá)的問題
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 關(guān)于原核表達(dá)中，IPTG,KAN等的配制和最終工作濃度問題�。。�
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 原核表達(dá)SDS-PAGE問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助】 關(guān)于原核表達(dá)【有效日期截止：2011年2月28日】
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 原核表達(dá)蛋白降解 有效期到2010.8.5
已經(jīng)有10人回復(fù)
4樓2012-12-30 16:44:22
snoopyzxx
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 3232.6
- 散金: 1266
- 紅花: 43
- 帖子: 2256
- 在線: 276.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 548497
- 注冊(cè): 2008-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 全球變化生態(tài)學(xué)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking: 金幣+5, MolEPI+1, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問題。 2012-12-30 18:55:57
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking: 金幣+5, MolEPI+1, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問題。 2012-12-30 18:55:57
|
載體構(gòu)建好了，鑒定沒問題后，就轉(zhuǎn)化表達(dá)菌啊，pET系列的要轉(zhuǎn)化帶DE3的表達(dá)菌，比如BL21（DE3）等，DH5a不能用來表達(dá)pET28a載體。 如果已經(jīng)轉(zhuǎn)化了表達(dá)菌。那么可以挑克隆，進(jìn)行小量誘導(dǎo)了。 具體方法就是： 1、挑克隆到試管中，比如20ml試管中裝入5mlLB培養(yǎng)基，加相應(yīng)的抗生素。過夜培養(yǎng)得到種子菌。 2、同樣20ml試管中裝5ml LB培養(yǎng)基，接入搖好的種子菌，接種量1%-5%。自己看著接就行了。 3、37℃，200-250rpm培養(yǎng) 4、OD600到0.6-0.8時(shí)，加入母液濃度為1M的IPTG，致終濃度0.1-1.0mM。第一次小誘可以加到終濃度1mM。 5、37度過夜誘導(dǎo)。16小時(shí)左右。 6、第二天取1ml菌液，離心，菌體沉淀用100ul 去離子水，或PBS或TRIS buffer重選，加loading buffer跑電泳。 7、如果確定有表達(dá)，就可以破菌鑒定可溶性了。 |
2樓2012-12-30 13:24:14
3樓2012-12-30 16:42:18
snoopyzxx
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 3232.6
- 散金: 1266
- 紅花: 43
- 帖子: 2256
- 在線: 276.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 548497
- 注冊(cè): 2008-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 全球變化生態(tài)學(xué)
5樓2012-12-31 03:54:38
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +8 | cccchenso 2026-03-29 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +4 | 亞克西good 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +10 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[碩博家園] 求調(diào)劑 有機(jī)化學(xué)考研356分 +4 | Nadiums 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二 +10 | leaflight 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +12 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑085601 +3 | 要努力學(xué)習(xí)x 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥調(diào)劑 +5 | Feisty。 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856材料化工調(diào)劑 總分330 +14 | zhubinhao 2026-03-27 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +14 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-25 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +10 | A-哆啦Z夢(mèng) 2026-03-23 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +6 | kotoko_ik 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | Ymlll 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求調(diào)劑 +4 | gdlf9999 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研一志愿蘇州大學(xué)初始315（英一）求調(diào)劑 +3 | sbdksD 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料與化工303分求調(diào)劑 +4 | 為學(xué)666 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 上海電力大學(xué)材料防護(hù)與新材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收調(diào)劑研究生（材料、化學(xué)、電化學(xué)，環(huán)境） +4 | 我愛學(xué)電池 2026-03-23 | 4/200 |
|