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矛盾聚合體銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
已知基因序列，要用PCR克隆該基因，模板從哪里來(lái)？
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假設(shè)我已經(jīng)得到基因序列了，我也知道下一步要PCR，設(shè)計(jì)引物什么的，但是我就是不知道模板從哪里來(lái)（我手上沒(méi)有現(xiàn)成的）。。。是直接搗碎一個(gè)人的細(xì)胞提取全DNA嗎？這樣的話，模板未免也太多太雜了吧，得浪費(fèi)多少核苷酸啊。。。 我的想法是，把DNA提取出來(lái)以后用限制酶切了，然后電泳，比如目的基因是500bp的，那我就選500bp的區(qū)段電泳出來(lái)的DNA片段作PCR。。�？墒�，即便是這樣，也還是含有很多很多的片段啊，而且限制酶切出來(lái)的位點(diǎn)正好在我要的基因上怎末辦？小弟只是處在理論階段的大一生，從來(lái)沒(méi)有動(dòng)手操作過(guò)，提取的想法未免幼稚，請(qǐng)各位見(jiàn)諒  |
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zhang881007
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7樓2013-01-06 14:25:53
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4樓2013-01-06 11:02:10
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5樓2013-01-06 11:03:52
tigertang
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1. 最省事的辦法：查文獻(xiàn)，向其他研究者要帶該基因的質(zhì)粒，直接用作模板或你自己的研究 2.從公司買帶cDNA的載體 3.自己提取RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板，擴(kuò)增你想要的基因（一定要事先確認(rèn)擬用于提取RNA的組織或細(xì)胞里，該基因表達(dá)比較高） |
6樓2013-01-06 11:15:38
susizheng
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8樓2013-01-06 15:15:55
tigertang
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9樓2013-01-06 17:27:05
10樓2013-01-06 19:26:23
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