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[求助]
]overlap PCR做不出來
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小蟲做重疊pcr連接兩個片段 1、分別擴增兩個片段，退火溫度為60 大小為945bp 950bp 純化后備用 2、以純化后的兩個片段為模板，以前面片段的5‘端引物和后面片段的3’端引物來進行重疊PCR。重疊區(qū)24bp .第一次連接上了退火溫度60，可之后怎么也連不上了，也做退火梯度，模板也稀釋做過梯度了，酶也換過了，怎么辦？ 體系是：50ul Buffer 5 條件是：初始變性 95 6min dNTP（10mM） 4 變性 98 30s primerA 1 退火 58/60 30s primerB 1 延伸 72 30s TemplateA 1.5 25cycle templateB 1.5 最終延伸 72 10min Enzyme tag-T 1 |
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Renavatio
木蟲 (小有名氣)
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青與青松2樓2013-01-15 14:15:35
3樓2013-01-15 14:45:40
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