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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 片段與載體的連接問題
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Yocan2012新蟲 (小有名氣)
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[求助]
片段與載體的連接問題
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本人自己構建了一個8863bp大小的載體，想要將1900bp大小的目的基因連接到該載體上，使用的內(nèi)切酶是SmaI/NotI。一開始很容易就連上了，1個月后再進行連接的時候，卻在也連不上了。酶切沒有問題；連接酶用的是Takara公司的Solution I，應該也沒有問題，因為用它連接T載體的效率比較高。 用T載體上面切下來的片段進行連接后，會出現(xiàn)較多連接到T上面的假陽性；如果用PCR產(chǎn)物直接酶切后連接的話，在選擇性平板上沒有菌落生長。 求高人或者有過同樣遭遇的蟲友指點。  |
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