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Yocan2012新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
片段與載體的連接問(wèn)題
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本人自己構(gòu)建了一個(gè)8863bp大小的載體，想要將1900bp大小的目的基因連接到該載體上，使用的內(nèi)切酶是SmaI/NotI。一開(kāi)始很容易就連上了，1個(gè)月后再進(jìn)行連接的時(shí)候，卻在也連不上了。酶切沒(méi)有問(wèn)題；連接酶用的是Takara公司的Solution I，應(yīng)該也沒(méi)有問(wèn)題，因?yàn)橛盟B接T載體的效率比較高。 用T載體上面切下來(lái)的片段進(jìn)行連接后，會(huì)出現(xiàn)較多連接到T上面的假陽(yáng)性；如果用PCR產(chǎn)物直接酶切后連接的話，在選擇性平板上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)。 求高人或者有過(guò)同樣遭遇的蟲(chóng)友指點(diǎn)。  |
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cicelyzh
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