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[求助]
TA克隆問題 求助~~
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最近TA克隆兩個片段，大小分別為2kb和3.2kb,分別為下圖左邊6個和右邊6個，中間和最后分別是λ/Hind 3和Marker 3，求分析轉(zhuǎn)化子提質(zhì)粒的電泳圖，轉(zhuǎn)進(jìn)去了嗎？ 個人感覺電泳圖很奇怪~ 謝謝 ！ 2013.1.18.JPG |
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chenfeng0519
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2樓2013-01-19 18:09:31
cicelyzh
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7樓2013-01-20 01:30:48
x_iao_le
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8樓2013-01-20 10:25:11
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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鹵煮上樣比質(zhì)粒大小的時候，由于質(zhì)粒閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)造成超螺旋，所以線性分子的DNA馬克是無法判斷大小的，為此必須上的對照是你所連載體的空載，作為負(fù)對照。 若所選克隆跑瓊脂糖膠大小比空載大，可暫且判斷有片段連入載體。 想進(jìn)一步判斷，則需做PCR驗證，做兩個平行，一組是測序引物，一組是所連基因合成時候的首尾引物，若兩者大小和預(yù)期一致，則基本可以判斷連入片段為目的基因。 可加入酶切驗證。 測序是最保險的驗證方法，沒有之一，PCR驗證正確后，測序不失為好的手段。 祝實驗順利：） |
9樓2013-01-20 10:47:03
heismeng
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10樓2013-01-22 15:43:29
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