 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4303 | 回復(fù): 34 | ||
fayzhao金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
雙酶切后切膠回收
|
|
|
各位蟲友好： 目前，我正在做質(zhì)粒雙酶切，體系40ul： dd水 補足40ul 10Xtango buffer 4ul 質(zhì)粒 2ug kpnI 2ul bglII 2ul 37℃反應(yīng)5h,電泳檢測圖如下： 目的是為了回收目的條帶（300多bp），切膠回收用了takara的和axygen的，都沒有回收到，跑膠沒有任何條帶。接下來我要做的是將目的基因連接到表達(dá)載體中，回收不到怎么辦哪？求幫助�。�！ 2013-1-20雙酶切_副本.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有146人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 各種綜合問題：酶切 膠回收 質(zhì)粒濃縮 測濃度
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 目的基因片段膠回收后酶切，然后再跑膠后發(fā)現(xiàn)條帶很弱，怎么改進（求助）
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 空質(zhì)粒雙酶切后大小不對，糾結(jié)！
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 分步酶切 回收不到片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請教PCR產(chǎn)物酶切后是否可以直接過柱純化而不膠回收？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- PET-32a雙酶切無法回收
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 酶切后未純化連接出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 雙酶切問題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問題請教
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 有誰試過雙酶切的同時加堿性磷酸酶
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 表達(dá)載體的構(gòu)建
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 求教關(guān)于用QIAquick PCR Purification Kit 是否能用來回收雙酶切過的pcr產(chǎn)物
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助 雙酶切驗證陽性克隆的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 雙酶切連接表達(dá)載體，兩個月都沒做出來，問題到底出在哪里呢~？求指點
已經(jīng)有52人回復(fù)
- PGEX為何膠回收時只做雙酶切？
已經(jīng)有7人回復(fù)
fayzhao
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 809.6
- 帖子: 97
- 在線: 106.4小時
- 蟲號: 1573744
- 注冊: 2012-01-11
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2013-01-23 18:54:39
fayzhao
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 809.6
- 帖子: 97
- 在線: 106.4小時
- 蟲號: 1573744
- 注冊: 2012-01-11
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
22樓2013-01-26 18:08:25
fayzhao
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 809.6
- 帖子: 97
- 在線: 106.4小時
- 蟲號: 1573744
- 注冊: 2012-01-11
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
23樓2013-01-26 18:11:57
轉(zhuǎn)基因猴子
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 3791.5
- 散金: 29
- 紅花: 4
- 帖子: 784
- 在線: 277.7小時
- 蟲號: 450786
- 注冊: 2007-11-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2013-01-23 17:55:50
fayzhao
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 809.6
- 帖子: 97
- 在線: 106.4小時
- 蟲號: 1573744
- 注冊: 2012-01-11
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2013-01-23 18:58:07
raindick1231
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 93.3
- 帖子: 83
- 在線: 26.5小時
- 蟲號: 649284
- 注冊: 2008-11-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物學(xué)研究的新技術(shù)、新方
5樓2013-01-23 19:11:01
轉(zhuǎn)基因猴子
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 3791.5
- 散金: 29
- 紅花: 4
- 帖子: 784
- 在線: 277.7小時
- 蟲號: 450786
- 注冊: 2007-11-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2013-01-23 19:35:07
酶切專家
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 96 (初中生)
- 金幣: 1610.8
- 紅花: 4
- 帖子: 149
- 在線: 41.3小時
- 蟲號: 1648414
- 注冊: 2012-02-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
fayzhao: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-01-24 10:20:46
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
fayzhao: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-01-24 10:20:46
|
一般克隆時，設(shè)計一個連接反應(yīng)，載體需要100ng左右，根據(jù)分子數(shù)比例（外源片段是載體的3-10倍），事實上，需要的外源片段的絕對量很少（一般不超過50ng). 但考慮到回收的小片段定量的準(zhǔn)確性，一般回收到的小片段濃度需要達(dá)到10ng/ul。而且再考慮回收時體積最少20ul，而小片段的回收效率一般很難超過50%，因而，回收時小片段的理論量至少是10ng/ul X 20ul X 2 =400ng。由于你的小片段只占你的載體分子的1/10---1/15，因而，你進行酶切時就需要載體至少4--6ug.否則，你很難回收到足夠量的小片段進行隨后的連接。 為了保證載體的完全酶切，你可能需要利用double digestion disigner精確計算酶切所需要的酶量。 |
7樓2013-01-23 22:12:27
11ychen
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 117.1
- 散金: 255
- 帖子: 96
- 在線: 45小時
- 蟲號: 1432831
- 注冊: 2011-10-09
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
8樓2013-01-24 10:09:01
匿名
用戶注銷 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
- 金幣: 766.4
- 帖子: 84
- 在線: 86.9小時
- 蟲號: 0
- 注冊: 2012-04-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
9樓2013-01-24 10:14:11
fayzhao
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 809.6
- 帖子: 97
- 在線: 106.4小時
- 蟲號: 1573744
- 注冊: 2012-01-11
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
10樓2013-01-24 10:21:32
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 fayzhao 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +8 | z1z2z3879 2026-03-16 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +5 | 搗蛋豬豬 2026-03-11 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +4 | zbzihdhd 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +12 | 生如夏花… 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +5 | 時間點 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] [導(dǎo)師推薦]西南科技大學(xué)國防/材料導(dǎo)師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范071000，325求調(diào)劑 +6 | RuitingC 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[教師之家] 焦慮 +7 | 水冰月月野兔 2026-03-13 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
 機械專碩調(diào)劑
+3
|
笨笨兔子 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 255求調(diào)劑 +3 | 李嘉慧， 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【0703化學(xué)調(diào)劑】-一志愿華中師范大學(xué)-六級475 +5 | Becho359 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調(diào)劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +9 | Koxui 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 小匕仔汁 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-12 | 3/150 |
|