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[求助] PCR電泳結(jié)果分析，跪求解答

我重復(fù)了有4、5次，但每次做出來都是這種結(jié)果。求解為什么引物1擴增出來的產(chǎn)物會是"W"形，而另一個引物就好好的。
說明：圖1，左邊是引物2(aqp4)的PCR結(jié)果，右邊是引物1(aqp3)的結(jié)果
如果哪位蟲友有比較好的引物，求賜教，萬分感謝了��！

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1樓 2013-02-17 22:32:13

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huiniss

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-02-18 14:11:57

樓主的標(biāo)準(zhǔn)條帶也是U型的啊，應(yīng)該不是引物的問題�？梢钥紤]電泳系統(tǒng)參數(shù)問題，改善一下參數(shù)。例如EB染色下1.5%瓊脂糖凝膠電泳50V，1.5-2h

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2樓2013-02-18 08:43:54

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wqj1988926

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-02-18 14:11:48

樓主的PCR產(chǎn)物是在同一塊膠上跑電泳的，應(yīng)該是配的膠不均勻的問題，所以可能會有跑成W形的，重新制膠，再跑下。
樓主引物一的特異性好像不怎么好，有非特異性的擴增，建議重新設(shè)計引物。

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風(fēng)雪夜歸人

3樓2013-02-18 09:11:30

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sxxuan

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是不是跑的電壓還是電流有問題？樓上有人提到過marker也跑得不整齊，一切以marker為準(zhǔn)
有非特異性擴增，如果是為了克隆的話，切膠也無所謂
在排除了膠或電流電壓的原因后，也可以減少上樣量試試

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你的日子如何，你的力量也必如何！

4樓2013-02-18 15:29:06

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duane

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不是引物的問題，應(yīng)該是你電泳出的問題。marker也有些彎曲

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5樓2013-02-18 15:56:01

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daniel_tang

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感覺是電泳的問題。不如把左邊的和右邊的互換一下，用?砼懦@個因素。

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player,gamer,lifer

6樓2013-02-18 17:12:38

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寒冰利劍

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根據(jù)marker的條帶，應(yīng)該是膠制的有問題

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豈能盡如人意，但求無愧我心。

7樓2013-02-19 00:28:48

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引用回帖:

3樓: Originally posted by wqj1988926 at 2013-02-18 09:11:30
樓主的PCR產(chǎn)物是在同一塊膠上跑電泳的，應(yīng)該是配的膠不均勻的問題，所以可能會有跑成W形的，重新制膠，再跑下。
樓主引物一的特異性好像不怎么好，有非特異性的擴增，建議重新設(shè)計引物。

膠都是完全溶解然后選定同一個地方一次把膠倒下去，應(yīng)該不是膠不均勻的問題。但是您說的有非特異性條帶，我確實也注意到了，打算重新設(shè)計再做！

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8樓2013-02-19 00:44:24

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引用回帖:

2樓: Originally posted by huiniss at 2013-02-18 08:43:54
樓主的標(biāo)準(zhǔn)條帶也是U型的啊，應(yīng)該不是引物的問題�？梢钥紤]電泳系統(tǒng)參數(shù)問題，改善一下參數(shù)。例如EB染色下1.5%瓊脂糖凝膠電泳50V，1.5-2h

嗯，謝謝您的建議，電壓我一直用的是75V，之前marker都是正常的，但是換了個實驗室的條件，400bp以上似乎經(jīng)常出現(xiàn)條帶扭曲

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9樓2013-02-19 00:45:57

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引用回帖:

4樓: Originally posted by sxxuan at 2013-02-18 15:29:06
是不是跑的電壓還是電流有問題？樓上有人提到過marker也跑得不整齊，一切以marker為準(zhǔn)
有非特異性擴增，如果是為了克隆的話，切膠也無所謂
在排除了膠或電流電壓的原因后，也可以減少上樣量試試

膠應(yīng)該是均勻的，我左邊右邊都上樣過引物1的擴增產(chǎn)物，都會出現(xiàn)類似的現(xiàn)象。不過好像400bp以上，我跑的這幾次marker都有點扭曲，不知道該怎么解決了

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10樓2013-02-19 00:47:15

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