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su5five新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助基因克隆指導(dǎo)！
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各位高手： 我是一個新手，現(xiàn)在有一個基因需要克隆，目前的狀況是：這個基因在我需要克隆物種的同源性相近的物種上面已經(jīng)克隆出來。我只需要這個基因的部分DNA序列，請問我該怎樣操作？用什么樣的方法？實驗需要哪些藥品？越詳細(xì)越好！萬分感謝！金幣有限。。。 toll樣受體基因 實驗對象蝦！ |
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2樓2013-02-26 16:50:44
wangcaijuan
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1057.5
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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首先你應(yīng)該問問同門師兄姐，你們實驗室用的基因克隆是什么手段。不同方法步驟是完全不一樣的。我也是個新手，我先把我用過的gateway方法的步驟說一下吧。 1，先決定需要的目的片段，然后在上下游設(shè)計含attB-位點的引物。 2，PCR擴增目的片段并電泳割膠回收提純目的基因。 3，BP反應(yīng)將目的基因轉(zhuǎn)入載體質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌。 4，篩選陽性克隆，先電泳比對質(zhì)粒大小，然后測序確定目的基因是否正確插入質(zhì)粒載體。 5，再進(jìn)行LR反應(yīng)，將目的基因轉(zhuǎn)入Destinationz質(zhì)粒載體，同樣篩選陽性克隆，測序確定基因是否正確。 |
3樓2013-02-26 18:29:37
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