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mangmanglulu

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如何在切膠回收的DNA片段兩端添加P32標(biāo)記呢？有沒(méi)有相關(guān)的試劑盒？？請(qǐng)大家不吝指教，謝謝

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1樓 2013-02-26 13:39:21

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mangmanglulu

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-26 14:13:36
如果是PCR產(chǎn)物或者合成的oligo直接用T4 polynucleotide kinase，底物用γ-32P ATP。如果DNA片段本身帶5’P的話，需要先去磷酸化，然后再做標(biāo)記。

用這個(gè)T4 PNK是不是還得購(gòu)買一些γ-32P ATP？
我是想在我回收的PCR產(chǎn)物末端添加標(biāo)記，如何確定就您說(shuō)的那個(gè)DNA片段本身是否帶5‘P呢？

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3樓2013-02-27 09:57:30

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mangmanglulu: 回帖置頂 2013-02-27 10:06:41

如果是PCR產(chǎn)物或者合成的oligo直接用T4 polynucleotide kinase，底物用γ-32P ATP。如果DNA片段本身帶5’P的話，需要先去磷酸化，然后再做標(biāo)記。

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2樓2013-02-26 14:13:36

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另我還想問(wèn)一下那個(gè)放射性同位素標(biāo)記對(duì)實(shí)驗(yàn)室有沒(méi)有一定的要求��？我看有的說(shuō)用生物素等非同位素標(biāo)記，我接下來(lái)準(zhǔn)備做凝膠遷移，能行嗎？

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4樓2013-02-27 10:19:43

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3樓: Originally posted by mangmanglulu at 2013-02-27 09:57:30
用這個(gè)T4 PNK是不是還得購(gòu)買一些γ-32P ATP？
我是想在我回收的PCR產(chǎn)物末端添加標(biāo)記，如何確定就您說(shuō)的那個(gè)DNA片段本身是否帶5‘P呢？...

T4 PNK只是kinase，底物要自己買。PCR產(chǎn)物一般是沒(méi)有5'P的，因?yàn)楹铣傻囊锊惶貏e要求的話是不帶有磷酸基團(tuán)的。所以PCR產(chǎn)物可以直接標(biāo)記。
另外，如果做放射性同位素實(shí)驗(yàn)的確對(duì)實(shí)驗(yàn)室和操作有一些要求�？梢杂蒙锼貥�(biāo)記代替進(jìn)一步做gel shift實(shí)驗(yàn)。

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5樓2013-02-27 11:11:01

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