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麥子綠豆銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
Native-PAGE
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求助： 小弟最近在做Native-PAGE，12%的分離膠、6%的濃縮膠，Tris-甘氨酸電泳buffer，與SDS-PAGE的區(qū)別就是這三種都沒(méi)有加SDS，其他成分一樣。110V冰浴電泳，電流基本在10-20mA。電泳完成后切割部分條帶進(jìn)行考染。 出現(xiàn)問(wèn)題是：我的蛋白都堆積在點(diǎn)樣位置，并沒(méi)有進(jìn)行遷移。請(qǐng)高手解答，在線等，謝謝！ |
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gaojuan1985
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【答案】應(yīng)助回帖
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是你的蛋白的等電點(diǎn)的問(wèn)題，我不記得是偏酸還是偏堿的話，就在上樣孔那里下不去了。可以嘗試：往loading buffer里面加一點(diǎn)SDS，使得SDS在樣品中的終濃度為0.0003%，室溫放置一會(huì)然后上樣，這樣可以避免電荷對(duì)電泳的影響，或者換個(gè)緩沖液系統(tǒng)，好像還有另一種緩沖液系統(tǒng)，具體不記得了 |
5樓2013-03-05 18:57:10
Phyrce
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2樓2013-03-05 15:54:00
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3樓2013-03-05 15:54:54
xingyel
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4樓2013-03-05 17:21:13
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6樓2013-03-05 18:58:38
麥子綠豆
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8樓2013-03-05 19:44:28
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10樓2013-03-08 09:40:34
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