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麥子綠豆銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
Native-PAGE
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求助： 小弟最近在做Native-PAGE，12%的分離膠、6%的濃縮膠，Tris-甘氨酸電泳buffer，與SDS-PAGE的區(qū)別就是這三種都沒有加SDS，其他成分一樣。110V冰浴電泳，電流基本在10-20mA。電泳完成后切割部分條帶進(jìn)行考染。 出現(xiàn)問題是：我的蛋白都堆積在點樣位置，并沒有進(jìn)行遷移。請高手解答，在線等，謝謝！ |
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xingyel
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4樓2013-03-05 17:21:13
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3樓2013-03-05 15:54:54
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amisking: 金幣+3, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-03-05 20:22:09
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是你的蛋白的等電點的問題，我不記得是偏酸還是偏堿的話，就在上樣孔那里下不去了。可以嘗試：往loading buffer里面加一點SDS，使得SDS在樣品中的終濃度為0.0003%，室溫放置一會然后上樣，這樣可以避免電荷對電泳的影響，或者換個緩沖液系統(tǒng)，好像還有另一種緩沖液系統(tǒng)，具體不記得了 |
5樓2013-03-05 18:57:10
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