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麥子綠豆銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
Native-PAGE
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求助: 小弟最近在做Native-PAGE,12%的分離膠、6%的濃縮膠,Tris-甘氨酸電泳buffer,與SDS-PAGE的區(qū)別就是這三種都沒有加SDS,其他成分一樣。110V冰浴電泳,電流基本在10-20mA。電泳完成后切割部分條帶進(jìn)行考染。 出現(xiàn)問題是:我的蛋白都堆積在點(diǎn)樣位置,并沒有進(jìn)行遷移。請(qǐng)高手解答,在線等,謝謝! |
銅蟲 (小有名氣)
銅蟲 (小有名氣)
木蟲 (小有名氣)
新蟲 (正式寫手)
是你的蛋白的等電點(diǎn)的問題,我不記得是偏酸還是偏堿的話,就在上樣孔那里下不去了。可以嘗試:往loading buffer里面加一點(diǎn)SDS,使得SDS在樣品中的終濃度為0.0003%,室溫放置一會(huì)然后上樣,這樣可以避免電荷對(duì)電泳的影響,或者換個(gè)緩沖液系統(tǒng),好像還有另一種緩沖液系統(tǒng),具體不記得了 |
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