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wxl.1989822金蟲 (小有名氣)
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[求助]
pET28a載體蛋白表達為包涵體
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RT 本人最近在做利用pET28a載體表達純化蛋白，菌是BL21，最近連續(xù)兩次跑膠都是破碎后沉淀有目的條帶，上清非常淡條帶。具體實驗步驟也就是：誘導(dǎo)后菌體4度離心后破碎，不過破碎后我采用的是常溫離心10分鐘左右，會不會是因為這樣引起的蛋白被沉淀了？注：誘導(dǎo)采用的是終濃度0.2 0.4 0.6 0.8 1.0的梯度。誘導(dǎo)溫度25和37結(jié)果差不多。 |
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試試ArcticExpress Competent Cells，我用的載體和你一樣，蛋白可溶性很好。 http://www.chem-agilent.com/pdf/strata/230191.pdf |
4樓2013-03-18 01:51:43
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5樓2013-05-18 11:41:12
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