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cdmmore銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
重組質(zhì)粒測(cè)序問(wèn)題
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各位大俠好，我構(gòu)建了一個(gè)重組質(zhì)粒要用來(lái)表達(dá)的，用T7 promoter 測(cè)序，結(jié)果不能反應(yīng)出T7啟動(dòng)子區(qū)域的序列，酶切位點(diǎn)Nde1距離T7啟動(dòng)子65 bp左右，請(qǐng)問(wèn)酶切反應(yīng)是否會(huì)導(dǎo)致距離酶切位點(diǎn)65 bp左右的片段發(fā)生突變呢？因?yàn)槲乙ＷC啟動(dòng)子序列正確，那么是否有必要設(shè)計(jì)引物測(cè)出T7啟動(dòng)子的序列呢？ 謝謝大家啦！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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cdmmore: 金幣+1, ★有幫助, 謝謝 2013-03-25 10:52:54
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助交流！ 2013-03-26 04:29:17
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| 測(cè)序時(shí)靠近引物的序列往往讀不出來(lái)。酶切一般不會(huì)造成序列突變。一般堿基錯(cuò)誤是發(fā)生在PCR的時(shí)候。如果你為了保險(xiǎn)起見(jiàn)，想測(cè)定啟動(dòng)子序列，需要把測(cè)序引物設(shè)計(jì)到啟動(dòng)子上游30-50nt。 |
2樓2013-03-25 05:39:09
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