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[求助]
求教血漿樣品進(jìn)HPLC前處理過程
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用HPLC測血漿藥物濃度,預(yù)計(jì)待測濃度在100ng——4000ng之間。 之前用的血漿處理方法是這樣的: 取100ul血漿樣品,加50ul內(nèi)標(biāo),850ul甲醇————混勻1min——離心10min————取上清————過濾進(jìn)樣(每次進(jìn)樣20ul)。【我用的流動(dòng)相是乙腈和水,標(biāo)準(zhǔn)樣品是用甲醇配制的! 結(jié)果出來高中低三個(gè)濃度的回收率呈遞減趨勢,相差很大,低濃度大概有50%~60%。然后看文獻(xiàn)上的血樣處理方式好像是有這樣的: 取400ul血漿樣品,加20ul內(nèi)標(biāo),加5ml混合萃取劑————混勻、離心各10min——取上清氮?dú)獯蹈伞?00ul流動(dòng)相復(fù)溶進(jìn)樣。 我的問題是: 1、氮?dú)獯蹈稍購?fù)溶的目的是為了濃縮嗎?這一步對(duì)提高回收率有什么作用嗎?用上述文獻(xiàn)中方法處理之后,是不是相當(dāng)于將原來400ul里的藥物濃縮到最后100ul中(理想中),就是濃度變成了4倍嗎? 2、我取的血漿樣品只有100ul,而且最后用100ul流動(dòng)相復(fù)溶的話實(shí)在太少了,我用的進(jìn)樣瓶是1ml的,100ul剛蓋過瓶底,針頭吸不到樣品。我想在原來用甲醇萃取一遍之后,再加一些甲醇混勻提取一次,這樣會(huì)不會(huì)回收率能高些? 3、請(qǐng)教各位大神有沒有更好、更簡單的處理方法?我做的血樣大概有400多個(gè)。。。。。。 |
鐵蟲 (初入文壇)
木蟲 (正式寫手)
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氮?dú)獯蹈梢环矫媸菫榱顺ビ袡C(jī)相(萃取時(shí)一般都是二氯甲烷、乙醚等有機(jī)相,一般不會(huì)直接把這些進(jìn)柱子),另外,如果復(fù)溶體積和開始時(shí)血漿體積不同,也能起到濃縮的作用,比如400微升血漿,最后復(fù)溶到100微升,就是濃縮了4倍,更利于樣品的檢測,但是你用400微升復(fù)溶就沒有濃縮倍數(shù)了。如果講簡單的樣品前處理的話,對(duì)于常規(guī)方法沒有什么好辦法的,甲醇/乙腈沉淀蛋白樣品處理時(shí)間已經(jīng)很短了,但是樣品相對(duì)液液萃取臟一些,對(duì)柱子不好。 |
木蟲 (正式寫手)
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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