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求教血漿樣品進(jìn)HPLC前處理過(guò)程
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用HPLC測(cè)血漿藥物濃度，預(yù)計(jì)待測(cè)濃度在100ng——4000ng之間。 之前用的血漿處理方法是這樣的： 取100ul血漿樣品，加50ul內(nèi)標(biāo)，850ul甲醇————混勻1min——離心10min————取上清————過(guò)濾進(jìn)樣（每次進(jìn)樣20ul）�！疚矣玫牧鲃�(dòng)相是乙腈和水，標(biāo)準(zhǔn)樣品是用甲醇配制的�！� 結(jié)果出來(lái)高中低三個(gè)濃度的回收率呈遞減趨勢(shì)，相差很大，低濃度大概有50%~60%。然后看文獻(xiàn)上的血樣處理方式好像是有這樣的： 取400ul血漿樣品，加20ul內(nèi)標(biāo)，加5ml混合萃取劑————混勻、離心各10min——取上清氮?dú)獯蹈伞?00ul流動(dòng)相復(fù)溶進(jìn)樣。 我的問(wèn)題是： 1、氮?dú)獯蹈稍購(gòu)?fù)溶的目的是為了濃縮嗎？這一步對(duì)提高回收率有什么作用嗎？用上述文獻(xiàn)中方法處理之后，是不是相當(dāng)于將原來(lái)400ul里的藥物濃縮到最后100ul中（理想中），就是濃度變成了4倍嗎？ 2、我取的血漿樣品只有100ul，而且最后用100ul流動(dòng)相復(fù)溶的話(huà)實(shí)在太少了，我用的進(jìn)樣瓶是1ml的，100ul剛蓋過(guò)瓶底，針頭吸不到樣品。我想在原來(lái)用甲醇萃取一遍之后，再加一些甲醇混勻提取一次，這樣會(huì)不會(huì)回收率能高些？ 3、請(qǐng)教各位大神有沒(méi)有更好、更簡(jiǎn)單的處理方法？我做的血樣大概有400多個(gè)。。。。。。 |
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氮?dú)獯蹈梢环矫媸菫榱顺ビ袡C(jī)相（萃取時(shí)一般都是二氯甲烷、乙醚等有機(jī)相，一般不會(huì)直接把這些進(jìn)柱子），另外，如果復(fù)溶體積和開(kāi)始時(shí)血漿體積不同，也能起到濃縮的作用，比如400微升血漿，最后復(fù)溶到100微升，就是濃縮了4倍，更利于樣品的檢測(cè)，但是你用400微升復(fù)溶就沒(méi)有濃縮倍數(shù)了。如果講簡(jiǎn)單的樣品前處理的話(huà)，對(duì)于常規(guī)方法沒(méi)有什么好辦法的，甲醇/乙腈沉淀蛋白樣品處理時(shí)間已經(jīng)很短了，但是樣品相對(duì)液液萃取臟一些，對(duì)柱子不好。 |
4樓2013-04-01 12:29:31
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餃子8135樓2013-04-01 12:30:46
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