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[求助]
求教血漿樣品進HPLC前處理過程
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用HPLC測血漿藥物濃度，預(yù)計待測濃度在100ng——4000ng之間。 之前用的血漿處理方法是這樣的： 取100ul血漿樣品，加50ul內(nèi)標(biāo)，850ul甲醇————混勻1min——離心10min————取上清————過濾進樣（每次進樣20ul）�！疚矣玫牧鲃酉嗍且译婧退�，標(biāo)準(zhǔn)樣品是用甲醇配制的�！� 結(jié)果出來高中低三個濃度的回收率呈遞減趨勢，相差很大，低濃度大概有50%~60%。然后看文獻上的血樣處理方式好像是有這樣的： 取400ul血漿樣品，加20ul內(nèi)標(biāo)，加5ml混合萃取劑————混勻、離心各10min——取上清氮氣吹干——100ul流動相復(fù)溶進樣。 我的問題是： 1、氮氣吹干再復(fù)溶的目的是為了濃縮嗎？這一步對提高回收率有什么作用嗎？用上述文獻中方法處理之后，是不是相當(dāng)于將原來400ul里的藥物濃縮到最后100ul中（理想中），就是濃度變成了4倍嗎？ 2、我取的血漿樣品只有100ul，而且最后用100ul流動相復(fù)溶的話實在太少了，我用的進樣瓶是1ml的，100ul剛蓋過瓶底，針頭吸不到樣品。我想在原來用甲醇萃取一遍之后，再加一些甲醇混勻提取一次，這樣會不會回收率能高些？ 3、請教各位大神有沒有更好、更簡單的處理方法？我做的血樣大概有400多個。。。。。。 |
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3樓2013-04-01 12:21:01
2樓2013-04-01 11:21:56
xxaijwd
木蟲 (正式寫手)
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
餃子813: 金幣+20, ★★★★★最佳答案, 非常感謝你的幫助！ 2013-04-08 09:22:37
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氮氣吹干一方面是為了除去有機相（萃取時一般都是二氯甲烷、乙醚等有機相，一般不會直接把這些進柱子），另外，如果復(fù)溶體積和開始時血漿體積不同，也能起到濃縮的作用，比如400微升血漿，最后復(fù)溶到100微升，就是濃縮了4倍，更利于樣品的檢測，但是你用400微升復(fù)溶就沒有濃縮倍數(shù)了。如果講簡單的樣品前處理的話，對于常規(guī)方法沒有什么好辦法的，甲醇/乙腈沉淀蛋白樣品處理時間已經(jīng)很短了，但是樣品相對液液萃取臟一些，對柱子不好。 |
4樓2013-04-01 12:29:31
xxaijwd
木蟲 (正式寫手)
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餃子8135樓2013-04-01 12:30:46
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