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hc42木蟲 (小有名氣)
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[求助]
雙向電泳的一些細節(jié)問題
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各路大俠，走過路過不要錯過。雙向電泳博大精深，更多的是細節(jié)的把握，小弟初學(xué)雙向電泳，再次拋磚引玉，望各路大俠解吾燃眉之急，也為后學(xué)者一個資料。 問題1：蛋白裂解液中的IPG buffer的pH與膠條的pH之間有沒有嚴格的要求匹配？ps:我在兩篇文獻中看到膠條4-7的選擇了3-10的buffer。 問題2：BIO-RAD的17cm的膠條的水化液上樣量的范圍是多少？ps:我之前上樣量是360μl，但是很容易把水化液弄到電阻絲外或者膠的支撐面上。 問題3：第一向的電流在什么范圍內(nèi)算正常？ps:聚焦的時候，20μA/gel左右算正常嗎？ 問題4：大家覺得這張圖能用來分析嗎？ 電泳圖.png |
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hc42
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3樓2013-04-02 09:11:13
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【答案】應(yīng)助回帖
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1. IPG buffer的pH需要包括膠條的pH范圍，其作用是輔助蛋白尋找其在膠條中正確的等電點位置。所以跑4-7的膠條用3-10的IPG buffer完全沒有問題。 2. 我做BIO-RAD的17cm的膠條的時候一般是上樣量為300μl。樣品+水化液做330μl，超速離心后取300μl上樣。 3. 電流在聚焦過程中是變動的，20算是正常吧。 4. 膠能否用于分析主要看分辨率和重復(fù)性。不知道你想分析多少點呢？ |
2樓2013-04-02 00:17:01
cicelyzh
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4樓2013-04-02 15:11:09
hc42
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5樓2013-04-03 12:04:25
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