 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1591 | 回復(fù): 9 | |||
Cheryl1117新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
求助各位大神--關(guān)于PCR的問(wèn)題
|
|
最近設(shè)計(jì)了一對(duì)引物擴(kuò)增一段序列，用質(zhì)粒做的模板，目的條帶3000bp左右，擴(kuò)增條件：95 5min;35循環(huán)（95 30s--60 30s---72 1min）; 72 7min . 第一次擴(kuò)增用“r Taq酶”，結(jié)果是圖1，稀釋100倍的擴(kuò)增成功，稀釋1000倍的只有一個(gè)擴(kuò)出來(lái)，但都含有其他的雜帶。第二次擴(kuò)增用“r Taq酶和exTaq酶”同時(shí)擴(kuò)增，模板添加量分別是1微升（圖2）和2微升（圖3），結(jié)果1微升的擴(kuò)增條帶比2微升的要亮，另外，exTaq酶不但沒(méi)有擴(kuò)增出來(lái)目的條帶（僅僅在稀釋1000倍的1微升中有一個(gè)）反而雜條帶擴(kuò)增比較亮，這是什么原因呢？ 求各位大神指導(dǎo)~~~~ 1.jpg 2.jpg 3.jpg |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有292人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求助各位大神關(guān)于含組氨酸標(biāo)簽蛋白純化的問(wèn)題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求助，關(guān)于搭橋PCR
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助：約6kb質(zhì)粒做模板的pcr程序怎么設(shè)定啊
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 關(guān)于融合PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 求助！關(guān)于RT-PCR的問(wèn)題！
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 向RTPCR高手求助，關(guān)于RTPCR的空白對(duì)照問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- ＲＴ－ＰＣＲ問(wèn)題求助
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】TAIL-PCR 問(wèn)題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教關(guān)于PCR-DGGE的問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于做熒光定量pcr的模板問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教個(gè)關(guān)于inverse PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于pcr內(nèi)參b-actine的一個(gè)問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR中cdna合成的問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于降落pcr的問(wèn)題！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR問(wèn)題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教關(guān)于PCR的問(wèn)題�。。�
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】pcr中模板量的問(wèn)題
已經(jīng)有11人回復(fù)
alice
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 5487.5
- 紅花: 1
- 帖子: 617
- 在線: 112.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1206521
- 注冊(cè): 2011-02-19
- 專業(yè): 色譜分析
2樓2013-04-01 21:23:22
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香。鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-04-02 08:50:56
Cheryl1117: 金幣+1, ★有幫助 2013-04-02 19:40:08
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香。鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-04-02 08:50:56
Cheryl1117: 金幣+1, ★有幫助 2013-04-02 19:40:08
| PCR做35循環(huán)的情況下PCR檢測(cè)產(chǎn)物時(shí)已經(jīng)達(dá)到飽和，終產(chǎn)物的濃度不能完全反映模板濃度。此外，你說(shuō)的1微升模板比2微升的亮，需要在一塊膠上比較。有雜帶說(shuō)明是引物特異性不高或者PCR條件未達(dá)到最優(yōu)。你可以試試優(yōu)化退火溫度。此外，擴(kuò)增3kb片段，對(duì)taq酶來(lái)說(shuō)，每個(gè)循環(huán)的延伸時(shí)間應(yīng)該為3分鐘。不同的聚合酶的最適條件可能會(huì)有一定差別，需要分別做優(yōu)化。 |
3樓2013-04-01 23:49:36
lidonghong
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 116 (高中生)
- 金幣: 2071.8
- 散金: 21
- 紅花: 2
- 帖子: 403
- 在線: 167.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1098160
- 注冊(cè): 2010-09-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，分子生物版塊，期待你的精彩。 2013-04-02 08:50:35
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，分子生物版塊，期待你的精彩。 2013-04-02 08:50:35
|
1，又雜帶說(shuō)明引物的特異性不是很好，可提高退火溫度 2，不同的擴(kuò)增酶效率不一樣，有些保真性好的酶擴(kuò)增效率往往會(huì)低一點(diǎn) 3，你的目的條帶是3kbp，三步循環(huán)中72度延伸3min，1000bp/min 4，模板濃度太高是會(huì)抑制PCR的擴(kuò)增效率的，所以不是模板量越多越好，反之太低也是會(huì)降低擴(kuò)增效率的 |
4樓2013-04-02 08:36:50
意孤城_
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 32 (小學(xué)生)
- 金幣: 1223.8
- 散金: 506
- 紅花: 9
- 帖子: 533
- 在線: 55.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1600188
- 注冊(cè): 2012-02-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物材料
5樓2013-04-02 09:55:53
Cheryl1117
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 110.2
- 帖子: 43
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1930791
- 注冊(cè): 2012-08-09
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
6樓2013-04-02 19:32:27
Cheryl1117
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 110.2
- 帖子: 43
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1930791
- 注冊(cè): 2012-08-09
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
7樓2013-04-02 19:34:24
Cheryl1117
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 110.2
- 帖子: 43
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1930791
- 注冊(cè): 2012-08-09
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
8樓2013-04-02 21:47:43
eiieen
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 65.7
- 帖子: 98
- 在線: 17.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1382800
- 注冊(cè): 2011-08-29
- 專業(yè): 生物化學(xué)
★ ★
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2013-04-26 21:16:30
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2013-04-26 21:16:30
|
我們做過(guò)以質(zhì)粒為模板，目的片段長(zhǎng)度5000bp。 所以按你的3000bp目的條帶來(lái)建議： 1, 95度2:30分鐘預(yù)變性，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)增加雜帶 2, 72度延伸時(shí)間3:10分鐘 3，質(zhì)粒測(cè)測(cè)濃度，稀釋至20ng~100ng即可，這樣的PCR產(chǎn)物跑出來(lái)的電泳沒(méi)有原模板的雜帶。 4，跑電泳的時(shí)候加一個(gè)對(duì)照：作為模板的質(zhì)粒500納克-1微克 |
9樓2013-04-03 09:10:32
susan小水
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 32.3
- 帖子: 24
- 在線: 13.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 2527156
- 注冊(cè): 2013-06-30
- 性別: MM
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
10樓2013-08-14 21:00:34
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Cheryl1117 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿天大材料與化工（085600）總分338 +5 | 蔡大美女 2026-03-13 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求各位老師收留 +10 | 秋有木北 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑 +4 | 守候夕陽(yáng)CF 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +4 | Tyoumou 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑（0703有機(jī)化學(xué) +7 | ZY-05 2026-03-13 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專家開始管格式了 +4 | beefly 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八6八68 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動(dòng)化所實(shí)習(xí) +6 | Losir 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國(guó)石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +4 | 學(xué)海漂泊 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | ADT 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|