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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于重組蛋白的表達
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[求助]
關于重組蛋白的表達
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| 我做了個重組蛋白，不大，目的片段核苷酸才200bp，但是表達出來就是包涵體！我低溫誘導過，沒有表達。不知道是怎么了！我想問低溫誘導菌的濃度多少比較合適，我是在比較濃的時候誘導的，16度過夜！而且包涵體我純化，到洗的時候就是一坨一坨的，重懸不起來，都沒什么效果！請大家指教一下，謝謝！ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流應助 2013-04-07 17:22:32
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流應助 2013-04-07 17:22:32
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低溫下不表達有點奇怪.低溫誘導和37C誘導沒有操作上的區(qū)別,就是溫度而已,因為讓蛋白合成慢一點, suppose可以讓蛋白有更多的時間去fold. 你去查查你的protein有沒有cystine以及disulphide bond,如果有很多,不溶的問題庶幾可救.否則就只能是變性的方法純化了,6M urea 或者6M guanidine. after dialysis, some of the proteins may refold into the correct conformation, but a large portion will aggregate and precipitate |
2樓2013-04-07 15:13:04
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