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mhfazl71108新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于重組蛋白的表達(dá)
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| 我做了個(gè)重組蛋白，不大，目的片段核苷酸才200bp，但是表達(dá)出來(lái)就是包涵體！我低溫誘導(dǎo)過(guò)，沒(méi)有表達(dá)。不知道是怎么了！我想問(wèn)低溫誘導(dǎo)菌的濃度多少比較合適，我是在比較濃的時(shí)候誘導(dǎo)的，16度過(guò)夜！而且包涵體我純化，到洗的時(shí)候就是一坨一坨的，重懸不起來(lái)，都沒(méi)什么效果！請(qǐng)大家指教一下，謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流應(yīng)助 2013-04-07 17:22:32
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流應(yīng)助 2013-04-07 17:22:32
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低溫下不表達(dá)有點(diǎn)奇怪.低溫誘導(dǎo)和37C誘導(dǎo)沒(méi)有操作上的區(qū)別,就是溫度而已,因?yàn)樽尩鞍缀铣陕稽c(diǎn), suppose可以讓蛋白有更多的時(shí)間去fold. 你去查查你的protein有沒(méi)有cystine以及disulphide bond,如果有很多,不溶的問(wèn)題庶幾可救.否則就只能是變性的方法純化了,6M urea 或者6M guanidine. after dialysis, some of the proteins may refold into the correct conformation, but a large portion will aggregate and precipitate |
2樓2013-04-07 15:13:04
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