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再見七里香木蟲 (小有名氣)
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[求助]
Ni-NTA柱純化組氨酸標(biāo)簽蛋白求助
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| Ni-NTA柱中用到平衡緩沖液等緩沖液中總要含有一定濃度的NaCl，用于消除離子交換效應(yīng)，請(qǐng)問在蛋白純化過程中離子交換效應(yīng)指的是那些呢？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+3, 很詳細(xì) 2013-04-17 23:17:59
再見七里香: 金幣+10, ★★★很有幫助, 感謝！ 2013-04-18 08:58:51
kx444555: 金幣+3, 很詳細(xì) 2013-04-17 23:17:59
再見七里香: 金幣+10, ★★★很有幫助, 感謝！ 2013-04-18 08:58:51
| 如果加氯化鈉對(duì)你的蛋白沒有影響，建議加，一般是50-500mM，一般選150mM，差不多生理鹽水濃度。你可以做個(gè)對(duì)照看加氯化鈉和不加氯化鈉對(duì)你的蛋白純度和收率有沒有影響。原理其實(shí)和離子交換柱有點(diǎn)像，因?yàn)樗哪z顆粒上可能會(huì)有離子鍵，然后通過離子鍵非特異吸附蛋白。另建議加10-20mM咪唑在你的除洗脫buffer的所有buffer里面，并在上柱之前用高濃度咪唑過一遍柱子，平衡之后再上柱，有利于減少非特異性吸附。 |
2樓2013-04-17 23:07:08
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