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hechuguiqu11

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 動(dòng)物組織DNA提取已有2人參與

急求動(dòng)物組織DNA提取操作步驟及相關(guān)溶液配制方法。PS：下官是在嘗試了兩種種提取試劑盒之后，迫不得已選擇這個(gè)方法的，各位大俠幫幫忙吧！

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1樓 2013-04-16 14:36:31

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軌未

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

6樓: Originally posted by hechuguiqu11 at 2013-04-16 19:18:58
是酒精保存的，研磨前晾干。這些操作方法提取另外一個(gè)物種時(shí)很順利。換了一個(gè)物種就不行了。樣品比較新鮮。。。...

另個(gè)物種很好。這個(gè)就沒(méi)有。。。略詭異
檢驗(yàn)的時(shí)候條帶不亮，還是徹底沒(méi)有。如果亮度不足也沒(méi)關(guān)系。PCR沒(méi)問(wèn)題的

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7樓2013-04-16 19:21:37

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軌未

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-04-16 16:46:16

對(duì)于樓主嘗試了兩種試劑盒都失敗，表示遺憾。
用的什么牌子的失敗了呢。什么組織，肝臟？肌肉？
提DNA一般來(lái)說(shuō)是最靠譜的吖，不會(huì)失敗的吧。
說(shuō)說(shuō)你的操作處理，尤其是樣品用什么保存的。說(shuō)不定能發(fā)現(xiàn)失敗的原因。

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2樓2013-04-16 14:44:12

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liyu0355

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

取0．2g左右的肌肉于2mL的玻璃勻漿器中，加人450μLSTE液勻漿，倒人1.5mL Ep 管，加20％ SDS25μL，蛋白酶K(10mg／mL)25μL ，50oC消化過(guò)夜，酚、氯仿和異戊醇進(jìn)行常規(guī)基因組DNA抽提，基因組DNA置4oC冰箱中保存?zhèn)溆谩?

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3樓2013-04-16 17:16:57

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 軌未 at 2013-04-16 14:44:12
對(duì)于樓主嘗試了兩種試劑盒都失敗，表示遺憾。
用的什么牌子的失敗了呢。什么組織，肝臟？肌肉？
提DNA一般來(lái)說(shuō)是最靠譜的吖，不會(huì)失敗的吧。
說(shuō)說(shuō)你的操作處理，尤其是樣品用什么保存的。說(shuō)不定能發(fā)現(xiàn)失敗的原因 ...

我提取的動(dòng)物肌肉組織，實(shí)驗(yàn)操作都是按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行的，只是最后溶解DNA時(shí)用的100μL ddH2O，4℃保存。DNA檢測(cè)都是在提取出來(lái)之后就做的，用H2O也行的吧？

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4樓2013-04-16 18:58:12

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