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[求助]
提取的RNA 濃度低還能做電泳檢測質(zhì)量嗎？
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| 最近提取體外誘導(dǎo)的軟骨組織標(biāo)本的RNA時，發(fā)現(xiàn)濃度很低，才5ng/ul 左右。想做電泳檢測RNA質(zhì)量，但查了資料好像點(diǎn)樣沒有固定的標(biāo)準(zhǔn)，但似乎一般要求RNA的點(diǎn)樣量都要在1ug（或以上），照這樣我提取的RNA沒法做電泳了（要加200ul RNA）。可我?guī)状翁岬脻舛茸罡叩腞NA樣本也就197ng/ul... 本想如果電泳檢測RNA沒降解的話，就準(zhǔn)備做逆轉(zhuǎn)錄PCR 來檢測某種基因，現(xiàn)在卡殼進(jìn)行不下去了。暈，求教高手，還有沒有什么辦法？ |
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4樓2013-04-21 20:06:11
凌波麗
禁蟲
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking: 回帖置頂 2013-04-21 19:45:51
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RNA濃度低，就純化濃縮一下吧。 步驟如下（不唯一，僅供參考） RNA樣品用相同體積的酚/氯仿（酚和氯仿各50%體積，濃度參照RNAzol試劑盒）裝入一有蓋離心管離心10000rpm室溫15s，水相移入另一離心管，重復(fù)以上操作直到兩相間沒有蛋白質(zhì)沉淀為止，這樣蛋白質(zhì)基本上就去掉了。之后可以用核酸沉淀法回收核酸，2-4度，10000rpm離心15min，取上清液。上清液中加入等量異丙醇，顛倒數(shù)次，室溫靜置約10min。再2-4度，10000rpm離心10min，棄上清液。用70%乙醇洗滌RNA沉淀，靜置約1min。又2-4度，8500rpm離心5min，棄上清液。然后裝入Ep管，離心真空抽干數(shù)分鐘。最后少量用DEPC處理過的雙蒸餾水溶解后測電泳，大多數(shù)低溫保存。 |
2樓2013-04-21 17:14:44
3樓2013-04-21 18:53:47
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